Nature Methods:抗体质量的金标

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2015年7月30日 来源:生物通

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  几乎所有实验室都会用到抗体,抗体不仅是生命科学研究的重要工具,在免疫学诊断领域也是不可或缺的。市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐,由于缺乏评估抗体质量的标准方法,人们过去只能依赖于生产厂家的信用。

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生物通报道:几乎所有实验室都会用到抗体,抗体不仅是生命科学研究的重要工具,在免疫学诊断领域也是不可或缺的。市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐,由于缺乏评估抗体质量的标准方法,人们过去只能依赖于生产厂家的信用。

做过免疫荧光、免疫沉淀(IP)或者Western blot实验的人都知道,抗体优劣对实验结果有很大的影响。我们买到的抗体往往附有一份检验报告和一张western blot图,除此之外并没有什么额外的信息。而且某个实验室用得好好的抗体,在别处可能并不好用。

鱼龙混杂的抗体为生物学研究带来了许多不确定因素。为此,科学家们建立了一个评估抗体质量的通用标准。这项工作由六个研究团队共同完成,相关论文发表在近日的Nature Methods杂志上。

“过去人们难以判断一个抗体是否正常工作,因为这类实验往往耗时长而且成本高,”多伦多大学的Aled Edwards说。“我认为,缺乏抗体验证是一个严重的科研问题。”(延伸阅读:专家经验谈:抗体制备法的利与弊

研究人员为人们提供了一个以质谱为基础的标准操作步骤。他们通过这一方法评估了免疫沉淀抗体的质量,在1124个重组抗体中鉴定出了“IP金标抗体”。随后,一些“金标抗体”、表现没有那么好的“不确定抗体”和不起作用的抗体被送往其它研究团队进行验证。

绝大多数金标抗体在其它团队手中也表现出了很高的性能,有着很好的可重复性。研究人员还通过免疫荧光、Western blot和染色质免疫沉淀(ChIP)对这些抗体进行了测试。总的来说,IP金标抗体在免疫荧光和ChIP中也很好用,不过并不一定适合Western blot。研究人员指出,这是因为这些抗体选择性结合折叠的蛋白。

IP-MS能够给出定量的结果,”Edwards指出,人们可以利用这些定量数据,建立一个抗体质量的公共平台,帮助科学家们找到最符合自己需要的抗体。

 

生物通编辑:叶予

生物通推荐原文:Marcon, E. et al. Assessment of a method to characterize antibody selectivity and specificity for use in immunoprecipitation. Nat Methods. 2015 Jun 29. doi: 10.1038/nmeth.3472.

 

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