数字PCR发现乳腺癌的诊断标志物[创新技巧]

生物通报道 数字PCR技术作为一种工具，可鉴定在血液中循环的microRNA（miRNA）。近日，一项发表在《Oncotarget》上的研究支持了这个结果，并发现了一种有望用于乳腺癌诊断的miRNA。这项研究证实了数字PCR技术在精确定量无细胞miRNA上的临床应用。

在这项研究中，意大利费拉拉大学的研究人员利用Bio-Rad的QX200微滴式数字PCR（ddPCR）系统，确定了多种癌症患者的血浆和血清样本中关键miRNA分子的绝对水平。通过比较癌症患者和健康个体的数据，他们认为miR-181a-5p有望作为乳腺癌的标志物。

“我们证明，ddPCR可成功用于循环的miRNA标志物的检测，”这篇文章的第一作者Manuela Ferracin博士谈道。“对于任何一个选定的microRNA，这是一种了不起的验证和定量方法。”

与传统的荧光定量PCR方法相比，数字PCR有不少优势，包括不需要建立标准曲线，而结果也更加稳定，因为数字PCR对PCR效率的变化不太敏感。

Ferracin采用EvaGreen方法来定量多种常见癌症中的miRNA。他们从乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、黑色素瘤、甲状腺癌的患者以及健康个体上采集了80个血浆样本，并利用芯片和小RNA测序进行筛查。在确定了丰度最高的差异表达无细胞miRNA后，研究小组选择了9个不同的miRNA，利用ddPCR技术来定量。

多个miRNA在癌症患者的样本中表现出明显的上调或下调；这些miRNA包括miR-181a-5p，它之前被认为是乳腺癌的候选生物标志物。研究人员发现，这种miRNA在乳腺癌患者的血清中明显下调，而在血浆中不会。这表明它可以作为一种强大的诊断工具。

研究人员之后在更大的队列人群中验证了他们的结果。他们分析了两组乳腺癌患者的血清：一组来自美国，另一组来自意大利。这项研究的数据证实了之前的结果，表明两组血清样本中的miR-181a-5p浓度明显下降（意大利：p < 0.05；美国：p < 0.005）。研究正确鉴定了近70%的乳腺癌患者。

Ferracin博士认为，这种miRNA有望成为乳腺癌的标志物，不过还需要更多的验证，包括来自多个机构的更多样本。同时，这项研究也为数字PCR技术应用于miRNA的绝对定量打下了基础。（生物通 余亮）

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原文检索

Absolute quantification of cell-free microRNAs in cancer patients

Oncotarget (Impact Factor: 6.63). 05/2015