专家教你明智选购分光光度计[选购宝典]

市场上较为常见的是紫外可见分光光度计，可用来测量特定化合物所吸收或反射的光的量。它通常被用来确定溶液中颗粒的浓度。一些分光光度计也可以测定动力学反应。此外，一些分光光度计具有测定荧光的附加功能。在此，Eppendorf北美地区的产品经理Jessica Geisler博士介绍了每种仪器的优缺点，以及用户应该如何选购。

1941年，第一台商用的紫外可见分光光度计由美国贝克曼公司推出。几年来，分光光度计已经成为大家都十分熟悉的工具，基本上每个实验室必备。这些小巧的仪器为分析单个组分提供了一种简便的方法，应用于核酸和蛋白定量、酶动力学研究、细菌生长曲线的监控以及荧光检测。

市场上较为常见的是紫外可见分光光度计，可用来测量特定化合物所吸收或反射的光的量。它通常被用来确定溶液中颗粒的浓度。一些分光光度计也可以测定动力学反应。此外，一些分光光度计具有测定荧光的附加功能。

就每一种方法而言，它们都有自己的优点和缺点。在此，Eppendorf北美地区的产品经理Jessica Geisler博士介绍了每种仪器的优缺点，以及用户应该如何选购。

紫外可见分光光度计

几十年来，紫外可见（UV/Vis）分光光度计被广泛使用，成为实验室中重要的分析仪器。Geisler博士认为，在选择紫外可见分光光度计之前，应考虑一下它的特点。

优点

• 经济价值：这些仪器物超所值，只需要低的成本，就能带来稳定的操作。稍稍关心一下，它们就能保持平稳运行。维护过程只需要监控整体清洁度和灯的寿命。
• 使用简单：分光光度计是相对简单的仪器，几乎没有移动部件，因此，使用和维护都很简单。此外，许多厂商都提供直观的软件方案，带来令人满意的用户体验。
• 非侵入性：对所测量的材料没有直接的操作，因此样品的完整性不会受损。
• 显示污染：全光谱吸收读数能检测额外的峰，显示潜在污染物的存在。这个信息也许对下游分析是有用的。

缺点

• 选择性：请记住，紫外可见分光光度计不能区分在相同波长下吸收的目的样品和污染物。例如，所有核酸在260 nm左右都表现为峰；因此，完整的RNA和双链DNA以及降解的单链DNA无法区分。
• 杂散光：分光光度计使用的检测器是宽带的，这意味着它们对所有的光作出反应。如果样品中的杂质能反射光，那么就会记录错误的读数。杂散光也导致吸光度的减少，降低仪器的线性范围。
• 采样条件：温度、pH值、杂质和污染物都可能影响吸光度结果。所有这些因素都可能改变样品的吸收性能，导致不准确的读数。
• 灵敏度低：分光光度计的灵敏度往往不足以检测低浓度的样品。研究人员需要浓缩样品，这增加了操作和时间。

具有紫外功能的分光光度计

尽管测定荧光不如测定吸光度那么普遍，但对于样品鉴定而言，它甚至是一种更有效的方法。我们也需要了解这种仪器的优缺点，因为它适合不同的应用。

优点

• 灵敏度：荧光检测的灵敏度大约比吸收光检测高1000倍。这带来了更高的检测极限，同时只使用较少的样品材料。对于那些珍贵或数量有限的材料而言，这一点很重要。
• 特异性：只有发荧光的分子能采用这种方法检测，使得它的特异性更高。
• 浓度范围宽：荧光分析法一般能检测3-6个对数的浓度范围，而无需稀释样品。
• 结果准确：荧光检测的灵敏度和特异性有望带来更加精确的读数。

缺点

• 经济价值：仪器以及分析试剂的价格，可能让有些科学家肉痛。光源和滤光片是仪器的主要部件，带来了灵敏度和选择性检测，但也抬高了产品价格。在评估方法时，应考虑每个分析、甚至每个数据点的价格。
• 杂质：虽然荧光光度计不受浊度的影响，但光散射可能人为地增加所测得的读数。另一方面，如果干扰物质或杂质吸收光，则荧光读数可能会降低。
• 气泡：样品制备过程中产生的气泡可能导致读数不稳定或波动。
• pH值：荧光可能受到样品溶液pH值的影响，导致测量不准确。在相同条件下使用标准品、空白和样品，可避免这种影响。

选购的三个要点

无论是测定核酸、蛋白浓度还是酶活，分光光度计都是你的首选仪器。市场上有各种选择，让人眼花缭乱。Geisler认为，考虑三个重要因素，就能帮助你选到适合的方法和仪器。

1. 用途和灵活性：现在以及未来，你使用分光光度计来做什么。尽管所有的分光光度计都采用非侵入性的方法，但是具有荧光功能的分光光度计提供了更高的灵敏度和选择性。许多厂家都提供具有不同功能的分光光度计。

2. 易用性：在许多科研实验室，分光光度计用户的水平参差不齐。为方便大家操作，许多公司都提供了直观的软件。为了简单起见，软件通常包含在仪器内。它可能包括经常使用的应用程序和工具。此外，仪器上通常还带有USB接口，方便导出数据，这样就不需要连接电脑了。

3. 维护和可靠性：尽管分光光度计是相当简单的仪器，移动部件有限，但也需要一些维护来确保最可靠、最准确的测定。平常的维护大多是保持清洁并监控灯的寿命。不过在购买时需要确认仪器的保修（包括部件和人工），并与销售代表讨论保修的覆盖范围和时间限制。

虽说分光光度计不是很贵，但在购买之前也一定要做好功课，了解实验室现在及未来的需求。毕竟，准确的测量结果可对你的实验很关键。（生物通 余亮）