检测宿主细胞残留DNA,ddPCR好处多[新品推荐]

【字体: 时间:2015年08月25日 来源:生物通

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  通常,分析人员采用实时定量PCR(qPCR)来测定残留DNA的水平,这需要纯化出宿主细胞残留DNA,以去除样品中的PCR抑制剂。这一步不仅增加时间和成本,也会造成DNA的损失,导致污染水平被低估。为此,Bio-Rad公司推出了新产品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。

在制造治疗性的蛋白、疫苗及其他生物制品时,制药公司必须从细菌或哺乳动物宿主细胞中纯化出活性的分子。然而,由于这个过程的效率不高,宿主细胞的杂质(包括DNA)经常会污染产品。因此,制造商必须确保宿主细胞残留DNA(HCD)的水平低于WHO的标准,通常是100 pg/剂量以下。

这就需要严格的质量控制。通常,分析人员采用实时定量PCR(qPCR)来测定残留DNA的水平,这需要纯化出宿主细胞残留DNA,以去除样品中的PCR抑制剂。这一步不仅增加时间和成本,也会造成DNA的损失,导致污染水平被低估。

为此,Bio-Rad公司推出了新产品 – ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification。这种预混液可配合Bio-Rad的微滴式数字PCR系统使用,直接测定生物制品中的宿主细胞残留DNA。

与实时定量PCR技术相比,使用微滴式数字PCR(ddPCR)技术和预混液的好处在于可跳过DNA纯化的步骤,直接测定宿主细胞残留DNA。Why?因为微滴式数字PCR技术采用反应分液和终点分析,不容易受到PCR抑制的影响。

同时,ddPCR技术对靶分子的数量进行直接计数,而不需要建立标准曲线,因此大大简化了残留DNA的定量。据Bio-Rad介绍,每一批的ddPCR Supermix都是在严格的质量控制下生产的,确保不含可检测的大肠杆菌、小鼠、人、酵母和CHO细胞DNA。

ddPCR™ Supermix for Residual DNA Quantification是以2x浓度提供的,包含探针法ddPCR所需的各种组分,不含引物、探针和模板。它采用热启动聚合酶,确保酶在分液的过程中失活。

Bio-Rad的QX200微滴式数字PCR系统在两年前推出。与传统的定量PCR相比,数字PCR的精确度和灵敏度更佳。利用微滴式数字PCR技术,研究人员可以检测稀有突变,精确测定拷贝数变异,并对基因表达进行绝对定量。(生物通 余亮)

了解ddPCR平台以及此技术的更多应用

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