首款单细胞Western平台上市,带你了解蛋白表达异质性[新品推荐]

【字体: 时间:2016年12月07日 来源:生物通

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  ProteinSimple推出了全球首款单细胞Western平台。这台名叫Milo的仪器让你能够在单细胞水平上开展western blotting。现在,你可以平行分析数千个细胞,了解蛋白表达的异质性。你也可以对单个细胞中数十个目标蛋白进行多重检测,这意味着你可以更好地了解目标表达之间的相关性。

每个细胞都是独一无二的,这让人们不再满足于细胞群体的研究,而是对细胞之间的异质性愈发感兴趣。单细胞测序、单细胞成像,正成为如今的研究热点。不过,当你需要了解复杂生物样品的组成和行为时,单细胞蛋白表达信息却是至关重要的。

为此,ProteinSimple推出了全球首款单细胞Western平台。这台名叫Milo的仪器让你能够在单细胞水平上开展western blotting。现在,你可以平行分析数千个细胞,了解蛋白表达的异质性。你也可以对单个细胞中数十个目标蛋白进行多重检测,这意味着你可以更好地了解目标表达之间的相关性。

单细胞Western技术是由美国加州大学伯克利分校的Amy Herr实验室开发的。2014年6月,这项成果发表在《Nature Methods》杂志上,并引起了科学界的广泛兴趣。之后,Amy Herr和研究生Kelly Gardner,以及同事Josh Molho创办了Zephyrus Biosciences,这家公司在今年3月被ProteinSimple的母公司Bio-Techne收购。

Milo是如何工作的?

Milo是在scWest芯片上开展单细胞Western检测的。这种预制的聚丙烯酰胺凝胶包含6400个微孔,可平行捕获~1000个单细胞,开展1000次单细胞Western。

你需要做的只是将样品制备成单细胞悬液,而不需要裂解细胞,也不需要固定和透化。之后,将1 mL单细胞悬液加在scWest芯片上,让它静置5-15分钟。在重力的作用下,细胞沉降到微孔内。

接着,将芯片放入Milo中。在五分钟的时间内,它自动裂解芯片捕获的1000个细胞,并对每个裂解物开展SDS-PAGE分离。之后,Milo利用光让分离的蛋白质与凝胶共价结合。这个固定步骤让你摆脱了耗时且低效的转印。

在固定之后,你需要将芯片取出,放入Milo的杂交室中,让蛋白与抗体杂交。Milo不需要特殊的抗体或试剂,因此平常用的Western抗体就行。经过一抗和二抗的孵育,芯片上的荧光可利用普通的芯片扫描仪来扫描。之后,Scout软件自动开展数据分析,为你提供每个细胞的定量表达结果。

一个流程,多个目标

若你的某个蛋白目标,在流式分析中无法检测,那么试试Milo吧。它除了能检测细胞表面蛋白,还能检测细胞内蛋白、转录因子、磷酸化蛋白,以及没有流式抗体的目标。要知道,Western抗体至少是流式抗体的10倍,因此你的检测范围一下子扩大了。

你也可以同时检测相同细胞中的磷酸化蛋白和总蛋白,了解磷酸化程度随时间的变化。此外,你也可以利用Milo提供的sizing信息来鉴定蛋白异构体,而这是流式分析无法做到的。

通过这些测定,你可以了解目标表达的异质性和细胞类型的异质性。有些细胞的表达量很高,而有些细胞很低。Milo能够轻松测定这些细胞之间的差异,并量化各种蛋白的表达变化。同时,Milo也能数出有多少细胞表达特定蛋白,帮助你确定混合样品中的细胞亚型。

scWest芯片上的样品可保存9个月之久。因此,你可以在几个星期甚至几个月之后,重新分析你的样品,搜索新问题的答案。如果你同时开展单细胞RNA-Seq实验,也能等到测序实验完成后,再确定需要用Milo来验证哪些数据。总之,有了Milo,单细胞的基因表达分析就不再是难题。(生物通 余亮)

立即索取Milo Single-Cell Western平台的更多资料

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