首款单细胞Western平台上市，带你了解蛋白表达异质性[新品推荐]

每个细胞都是独一无二的，这让人们不再满足于细胞群体的研究，而是对细胞之间的异质性愈发感兴趣。单细胞测序、单细胞成像，正成为如今的研究热点。不过，当你需要了解复杂生物样品的组成和行为时，单细胞蛋白表达信息却是至关重要的。

为此，ProteinSimple推出了全球首款单细胞Western平台。这台名叫Milo的仪器让你能够在单细胞水平上开展western blotting。现在，你可以平行分析数千个细胞，了解蛋白表达的异质性。你也可以对单个细胞中数十个目标蛋白进行多重检测，这意味着你可以更好地了解目标表达之间的相关性。

单细胞Western技术是由美国加州大学伯克利分校的Amy Herr实验室开发的。2014年6月，这项成果发表在《Nature Methods》杂志上，并引起了科学界的广泛兴趣。之后，Amy Herr和研究生Kelly Gardner，以及同事Josh Molho创办了Zephyrus Biosciences，这家公司在今年3月被ProteinSimple的母公司Bio-Techne收购。

Milo是如何工作的？

Milo是在scWest芯片上开展单细胞Western检测的。这种预制的聚丙烯酰胺凝胶包含6400个微孔，可平行捕获~1000个单细胞，开展1000次单细胞Western。

你需要做的只是将样品制备成单细胞悬液，而不需要裂解细胞，也不需要固定和透化。之后，将1 mL单细胞悬液加在scWest芯片上，让它静置5-15分钟。在重力的作用下，细胞沉降到微孔内。

接着，将芯片放入Milo中。在五分钟的时间内，它自动裂解芯片捕获的1000个细胞，并对每个裂解物开展SDS-PAGE分离。之后，Milo利用光让分离的蛋白质与凝胶共价结合。这个固定步骤让你摆脱了耗时且低效的转印。

在固定之后，你需要将芯片取出，放入Milo的杂交室中，让蛋白与抗体杂交。Milo不需要特殊的抗体或试剂，因此平常用的Western抗体就行。经过一抗和二抗的孵育，芯片上的荧光可利用普通的芯片扫描仪来扫描。之后，Scout软件自动开展数据分析，为你提供每个细胞的定量表达结果。

一个流程，多个目标

若你的某个蛋白目标，在流式分析中无法检测，那么试试Milo吧。它除了能检测细胞表面蛋白，还能检测细胞内蛋白、转录因子、磷酸化蛋白，以及没有流式抗体的目标。要知道，Western抗体至少是流式抗体的10倍，因此你的检测范围一下子扩大了。

你也可以同时检测相同细胞中的磷酸化蛋白和总蛋白，了解磷酸化程度随时间的变化。此外，你也可以利用Milo提供的sizing信息来鉴定蛋白异构体，而这是流式分析无法做到的。

通过这些测定，你可以了解目标表达的异质性和细胞类型的异质性。有些细胞的表达量很高，而有些细胞很低。Milo能够轻松测定这些细胞之间的差异，并量化各种蛋白的表达变化。同时，Milo也能数出有多少细胞表达特定蛋白，帮助你确定混合样品中的细胞亚型。

scWest芯片上的样品可保存9个月之久。因此，你可以在几个星期甚至几个月之后，重新分析你的样品，搜索新问题的答案。如果你同时开展单细胞RNA-Seq实验，也能等到测序实验完成后，再确定需要用Milo来验证哪些数据。总之，有了Milo，单细胞的基因表达分析就不再是难题。（生物通 余亮）

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