J Pathol：应用Exiqon microRNA芯片研究结直肠癌

　　

中国解放军总医院（301医院）韩卫东教授和第二军医大学孙树汉教授合作指导研究小组，采用microRNA芯片对MSI型CRC进行了系统全面的microRNA组研究，并阐释microRNA在MSI型CRC中的分子病理作用。通过比较MSI型和MSS型的样本，在芯片筛选和PCR验证实验后发现8个microRNA可用于区分CRC的MSI亚型。其中，miR-484下调最显著。而miR-484的表达下调主要受CpG岛甲基化调控。通过体外和体内实验发现，miR-484作为肿瘤抑制分子抑制MSI型CRC细胞的生存活力。进一步研究表明，miR-484通过抑制靶基因CD137L减少MSI型CRC细胞的IL-8量。该研究成果于2015年发表在J Pathol上（影响因子7.33）。（芯片实验由康成生物提供技术服务）

研究背景

结肠直肠癌（CRC）是最常见的癌症之一，在全球癌症相关死亡原因中排第四。带有MSI（微卫星不稳定性）的结肠直肠癌（CRC）亚型定义明确，约占CRC的15%，其特征包括错配修复信号通路缺陷和典型临床病理特征。MSI型CRC有一定异质性，包括散发性CRC和遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC，Lynch综合征）两大类。这两类虽然都存在有缺陷的错配修复（MMR）信号通路，但临床病理表现差别大。而淋巴细胞浸润和致癌加速是HNPCC和散发型 MSI型CRC的共同特征。

技术路线

结果展示

 
    
图释：左图：芯片结果的聚类分析；右图：MSI型标记物的8个microRNAs对MSS亚型和MSI亚型组织样本的聚类结果。

 
图释：miR-484的启动子区CpG岛分析和甲基化程度检测
(A) 采用在线工具MethPrimer analysis 找到miRNA-484上游3 kb左右存在CpG岛；
(B, C) 采用MSP方法研究7个人CRC细胞系的miR-484启动子甲基化 (B)无处理；(C)5-aza处理。

图释：在多种CRC细胞中，分别敲除或过表达miR-484，结果发现miR-484能促进细胞凋亡，抑制细胞增殖，说明miR-484具有抑癌功能。

 
图释：miR-484靶基因预测和报告基因实验验证

研究意义
该项研究结果有助于更好地理解microRNA在特征型的MSI型CRC中的作用，并为未来针对这一类病人的早期诊断和基因治疗开发提供了基础。

原文出处
Qian M.,et al., Methylation-induced loss of miR-484 in microsatellite-unstable colorectal cancer promotes both viability and IL-8 production via CD137L. J Pathol 2015; 236: 165–174

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