用户名:

密 码:

测序 | miRNA | 表观遗传 | 蛋白研究 | 细胞研究 | 免疫学 | 转染 | PCR | qPCR | 核酸纯化 | 基因表达

您所在的位置:首页 > 新技术专栏

3.0版本的CRISPR,功能更强大[创新技巧]

3.0版本的CRISPR,功能更强大

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2016年4月28日 来源:生物通

摘要:

  CRISPR-Cas9系统带来了基因组编辑的飞跃,大大提高了它的精度和效率。它能够快速实现一些人类疾病的建模,对生物医学研究产生了重大的影响。当然,CRISPR系统仍在不断发展。最近,Jackson Laboratory的Albert Cheng和Mark Wanner就介绍了它的最新进展。

免费索取:

分享到:
  

CRISPR-Cas9系统带来了基因组编辑的飞跃,大大提高了它的精度和效率。它能够快速实现一些人类疾病的建模,对生物医学研究产生了重大的影响。当然,CRISPR系统仍在不断发展。最近,Jackson Laboratory的Albert Cheng和Mark Wanner就介绍了它的最新进展。

CRISPR-Cas9最初只能实现剪切和粘贴的功能,就像早期的智能手机。之后,Cas9核酸酶升级到2.0版本,也就是核酸酶失活的Cas9(dCas9)。dCas9不再切割DNA,但仍然在向导RNA的作用下与基因组序列结合。这时,它就像更高级的智能手机。dCas9可与不同的效应蛋白结合,介导基因调控、编辑等功能。不过,CRISPR 2.0的不足之处在于它每次只能执行一种功能。

Casilio系统

尽管CRISPR 2.0已被证明对研究很有用,但基因不是独立运作的,研究基因网络和复杂疾病需要更强大的功能。如今,3.0版本CRISPR,即Casilio,应运而生。这是一个功能强大的平台,让CRISPR/Cas9可执行多个任务,轻松实现新的功能。它就像一部新款的智能手机,可同时运行多个应用程序,并不断安装新的程序。

Casilio是指CRISPR-dCas9和效应蛋白与可编程的Pumilio(PUF)RNA结合蛋白相融合。RUF结构域含有8序列重复,这些可以编程,改变两个特定的氨基酸残基,即可识别4种RNA碱基中的1种。有了Casilio,dCas9就好像一个夹钳,让gRNA定位到你感兴趣的基因组区域。利用单个dCas9和一个可扩展的Casilio模块(效应蛋白与PUF蛋白的融合蛋白)库,Casilio可实现多种功能。

(图片来自Addgene)

Casilio所需的组件包括dCas9、至少一个sgRNA-PBS,以及Casilio模块。sgRNA-PBS作为带有一个或多个Pumilio结合位点的向导RNA,起了关键的作用。Addgene目前提供了多个模块,包括基因激活、基因抑制、染色体标记(荧光)、组蛋白乙酰转移酶模块等。

Casilio的应用

利用Casilio,研究人员能够通过单个向导RNA招募多个效应蛋白。在他们发表的文章中,Casilio能够多重利用PUF牵引着的效应蛋白,在多个位点同时实现精确的基因组操作。他们同时激活了OCT4,并抑制了SOX2。他们还证明了端粒和中心粒的双色标记。

另一个强大的应用就是蛋白复合物的组装。这让研究人员能够研究基因调控所涉及到的复合物。利用带有不同类型Pumilio结合位点的sgRNA,人们可以研究复合物中含有或不含特定组分的影响。也许还能研究化学计量对复合物功能的重要性,如招募x个组分A的分子 vs. y个组分B的分子。

目前Casilio表达载体只能用于瞬时转染,但研究人员也提供含有Casilio模块的Gateway供体质粒。这些可与Gateway兼容的其他载体共同使用。他们也在开发慢病毒表达载体,以便将Casilio导入其他类型的细胞。(生物通 薄荷)

原文检索

Casilio: a versatile CRISPR-Cas9-Pumilio hybrid for gene regulation and genomic labeling

Cell Research (2016) 26:254–257. doi:10.1038/cr.2016.3

(http://www.ebiotrade.com/)
版权所有,未经书面许可,不得转载

我来说两句(0)

[Ctrl+Enter]

加载读者评论......

相关文章:

    加载相关文章......

今日文章:

    加载今日文章......
    加载中......
    加载中......

技术期刊

GE期刊 | 基因快讯

    加载中......
    加载中......

更多>>

技术大讲堂

分子 | 细胞 | 蛋白 | 其它

    加载中......
    加载中......
    加载中......
    加载中......

更多>>

特价专栏

    加载中......

更多>>

会展信息

    加载中......

更多>>

生物通首页 | 生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 生物直通车 | 科研交流 | 正牌代理商 | 中国科学人 | 新技术专栏 | 技术讲座

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号