用户名:

密 码:

测序 | miRNA | 表观遗传 | 蛋白研究 | 细胞研究 | 免疫学 | 转染 | PCR | qPCR | 核酸纯化 | 基因表达

您所在的位置:首页 > 新技术专栏

光遗传学+CRISPR:利用光来控制基因组编辑[创新技巧]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2016年4月6日 来源:生物通

摘要:

  作为经常上头条的明星,光遗传学(optogenetics)和CRISPR这两个技术的碰撞会产生什么样的火花?2015年,科学家结合CRISPR和光遗传学技术,开发出各种光激活的CRISPR工具。这些工具让研究人员能够利用光从外部控制基因组编辑过程的地点、时机和可逆性。

免费索取:

分享到:
  

作为经常上头条的明星,光遗传学(optogenetics)和CRISPR这两个技术的碰撞会产生什么样的火花?2015年,科学家结合CRISPR和光遗传学技术,开发出各种光激活的CRISPR工具。这些工具让研究人员能够利用光从外部控制基因组编辑过程的地点、时机和可逆性。

从时空上控制转录

最初的光激活CRISPR系统于2015年年初发表,侧重于利用光来控制转录。两个独立的实验室,东京大学的Moritoshi Sato实验室和杜克大学的Charles Gersbach实验室,基于光诱导的异源二聚体隐花色素2(CRY2)和整合素结合蛋白1(CIB1),开发出相似的系统。他们的目标是利用光来开启和关闭基因的表达,同时赋予时空控制和可逆性。

Nihongaki等人开发出的系统是由两个融合蛋白组成的:1) 基因组锚定物 – 失活的Cas9蛋白(dCas9)与CIB1融合;2) 激活物 – CRY2光裂合酶同源区域(CRY2PHR)与转录激活域(VP64或p65)融合。一旦在细胞中表达,在gRNA指引下,dCas9-CIB1与目标DNA序列结合,而CRY2PHR-激活物自由漂浮。在蓝光的照射下,CRY2和CIB1二聚化,带来激活物,激活基因转录。

研究人员测试了多种组合来优化融合蛋白。他们发现,表现最好的组合是NLS-dCas9-trCIB1和NLSx3-CRYPHR-p65。在蓝光(470nm)的照射下采用狭缝模式,研究人员发现,人ASC1基因的表达可被空间控制。他们还不断开启和关闭蓝光,发现ASC1的表达也跟着做,说明控制的确是可逆且可重复的。

Polstein等人开发的光激活CRISPR/Cas9效应物(LACE)系统也采用了相似的策略,不过采用了不同的融合蛋白组合。经过优化的LACE系统包括:1) CIBN-dCas9-CIBN,其中CIBN是CIB1的N端片段,与dCas9的N端和C端融合;2) CRY2FL-VP64,全长的CRY2与转录激活域VP64融合。在HEK293T细胞中利用此系统来诱导人IL1RN的表达,研究人员发现2小时后mRNA水平提高11倍,30小时后提高400倍。此系统也被证明是可逆的和可重复的。

上一页 [1] [2] 下一页

(http://www.ebiotrade.com/)
版权所有,未经书面许可,不得转载

我来说两句(0)

[Ctrl+Enter]

加载读者评论......

相关文章:

    加载相关文章......

今日文章:

    加载今日文章......
    加载中......
    加载中......

技术期刊

GE期刊 | 基因快讯

    加载中......
    加载中......

更多>>

技术大讲堂

分子 | 细胞 | 蛋白 | 其它

    加载中......
    加载中......
    加载中......
    加载中......

更多>>

特价专栏

    加载中......

更多>>

会展信息

    加载中......

更多>>

生物通首页 | 生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 生物直通车 | 科研交流 | 正牌代理商 | 中国科学人 | 新技术专栏 | 技术讲座

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号