蛋白研究的明星工具: Duolink® PLA®技术

【字体: 时间:2017年01月03日 来源:默克

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  与传统的免疫测定相比,Duolink提供了一种简单、灵敏度高的原位检测内源蛋白的方法。该实验基于邻位连接技术(Proximity Ligation Assay, PLA),当一对PLA 探针足够接近(<40 nm)时会产生PLA信号,PLA信号的位置直接反映了蛋白表达量或蛋白复合体的亚细胞定位。

从事蛋白研究常常会遇到这样的问题:

找不到合适的检测低丰度蛋白的方法;
得不到令人信服的蛋白相互作用的结果;
担心蛋白过表达或融合标签后会改变其原有的功能……

而今这些都不再成为问题,来看看新一代蛋白研究利器——Duolink® PLA®技术到底有多强大。

与传统的免疫测定相比,Duolink提供了一种简单、灵敏度高的原位检测内源蛋白的方法。该实验基于邻位连接技术(Proximity Ligation Assay, PLA),当一对PLA 探针足够接近(<40 nm)时会产生PLA信号,PLA信号的位置直接反映了蛋白表达量或蛋白复合体的亚细胞定位。

了解Duolink 如何检测过去使用Co-IP方法无法检测到的蛋白质间相互作用:
Smad蛋白质与AP-1元件间的特殊相互作用决定了TGF-beta诱导的乳腺癌细胞侵袭。Sundqvist, A.等,Oncogene 2012年8月27日

了解Duolink如何检测单磷酸化修饰:
对乳腺癌中异构体特异性的Akt活化进行邻位连接分析鉴定得到活化的Akt1驱动着癌症演进。Spears, M.等J. Pathol. 227, (2012).

观看Duolink网络技术讲座

Duolink® 应用举例

1、检测稳定、瞬时和微弱的蛋白互作

Fig. 1 加入雌二醇培养48 hr的大鼠胚胎海马神经元,原位显示ER α与DYX1C1在神经突触中的互作。
红色:ER alpha/DYX1C1复合物;
绿色:actin蛋白;蓝色:细胞核

2、检测蛋白的翻译后修饰

Fig. 2 EGF刺激前后,用免疫荧光染色和PLA方法检测U343细胞中EGFR磷酸化水平的变化。PLA方法可以检测到EGFR的激活,而IF方法则不能。
红色:磷酸化的EGFR蛋白;蓝色:细胞核

3、高灵敏性的检测低丰度蛋白的表达

Fig. 3 分别用免疫荧光(左下图)和PLA方法(上图)检测A431细胞中EGFR的表达。与IF方法相比,PLA方法的信噪比高出100倍。红色:EGFR蛋白;蓝色:细胞核

更多信息请访问sigma.com/duolink

欢迎索取Duolink PLA技术的详细资料

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