Wes新一代超微量样品全自动蛋白质表达定量分析系统

【字体: 时间:2017年12月13日 来源:ProteinSimple

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  Wes 新一代超微量样品全自动蛋白质表达定量分析系统是美国ProteinSimple公司经典创新产品Wes全自动蛋白质表达定量分析系统的升级版,拥有更多独到优势。

Wes 新一代超微量样品全自动蛋白质表达定量分析系统是美国ProteinSimple公司经典创新产品Wes全自动蛋白质表达定量分析系统的升级版,拥有更多独到优势。

独有创新技术特点:
1. 化学发光信号值直接定量
2. 低至25个细胞的灵敏度
3. 2-440KD分子量范围
4. 无需转膜
5. 全自动化标准化
6. Western blot全程只需3小时
7. 6个数量级的HDR(宽动态范围曝光)模式

应用实例:

1. 培养胚胎。 2016年Nature文章在132个小鼠2-Cell胚胎中检测关键蛋白

发育生物学,干细胞研究等领域的科学家,需要在特定胚胎发育时期检测关键蛋白质表达水平,研究胚胎,胚胎干细胞等发育中的关键调节蛋白。2016年9月顶级杂志Nature,发表了挪威奥斯陆大学附属医院,美国加州路德维格癌症研究所科学家发表的文章,Broad histone H3K4me3 domains in mouse oocytes modulate maternal-to-zygotic transition,doi:10.1038/nature19360,Nature, Vol 537,548-552。组蛋白动态甲基化修饰在母体-合子过渡非常重要,但是在微量细胞中分析染色体组蛋白甲基化修饰存在技术瓶颈,本文作者开发了微量样品的Chip-sequence技术进行母体-合子过渡过程中组蛋白甲基化。KDM5A 和 KDM5B是母体-合子过渡必须蛋白,因此基因敲除是研究必须手段。在基因敲除后,需要在蛋白水平确认敲除结果。

培养的胚胎珍贵,少量细胞无法用传统蛋白质分析技术进行检测,ProteinSimple公司创新使用400nl毛细管进行蛋白质表达定量检测,解决了胚胎发育研究中微量样品蛋白质检测问题。

2. 激光显微切割

激光显微切割技术Laser capture microdissection (LCM)是从异质性组织样本中分离纯的细胞群,非常有用的方法。

激光显微切割获得细胞量非常有限,通常一次激光显微切割样品中的蛋白量,只够一次传统western blot,如果需要进行多靶蛋白检测,则样本量不够。更难用质谱等技术进行检测。

East Tennessee State University,内科学系科学家Mary Howell,将LCM和Wes结合起来,开发了微量样组织品获取及蛋白质表达定量分析平台。只需要使用1/20的激光显微切割组织蛋白裂解液即可进行相应靶蛋白检测。一次激光显微切割样本可以进行需要的多种靶蛋白检测。

3. 分选肿瘤干细胞/造血干细胞/免疫细胞

在很多生物医学研究中,需要使用磁珠或者流式,通过特定的marker,分选特定的细胞群,避免混合细胞对于生物医学研究的干扰。 但是分选到的细胞,数量通常都极其微量,在10000个左右,比如肿瘤干细胞等,造血干细胞等。微量细胞进行蛋白质水平分析,一直是世界性的难题。

2016年世界著名大学,西班牙萨拉曼卡大学医学院附属医院的科学家,使用磁珠分选CD34+造血祖细胞,然后将来自于骨髓异常增生综合症的外泌体(MVs-MSD)及正常人的外泌体(MVs-HD),转染入分选CD34+造血祖细胞,研究骨髓异常增生综合症患者的外泌体对MDM2的调节作用。

参考文献:
Microvesicles from Mesenchymal Stromal Cells Are Involved in HPC-Microenvironment Crosstalk in Myelodysplastic Patients.PLOS ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0146722 February 2, 2016

4. 稀缺生物医学样本

生物医学研究中,很多研究样品珍贵,稀缺。比如:

▪ 灵长类动物样本
▪ 动物胚胎
▪ 临床穿刺样本
▪ 医院临床样本库
▪ 罕见/典型疾病样本

在很多发育研究中,动物胚胎,比如小鼠胚胎是必须的模型。 从小鼠胚胎中提取特定组织,分选特定细胞群进行研究,面临细胞数量非常少的问题。2016年著名血液病杂志Blood刊发了美国辛辛那提大学辛辛那提儿童医学中心,血液肿瘤研究所科学家的文章。科学家发现Rho-A缺失会导致贫血。

科学家建立了Rho-A缺陷小鼠,从E13.5胚胎特异分选红细胞及胚胎肝脏CD71+细胞,使用Wes进行Rho-A检测,确认Rho-表达水平。发现RhoA缺陷可以引起下游citron激酶下调,组织网织红细胞有丝分裂,引起贫血。

影像检测E13.5胚胎鼠卵黄囊和胚胎肝,RhoA缺陷显示明显贫血

红细胞及胚胎CD71+细胞中检测RhoA表达水平

RhoA 下游参与细胞分裂微管组装的蛋白Cit-K,在RhoA缺失胚胎肝脏Ter119+网织红细胞,明显下调。

参考文献:
Cytokinesis failure in RhoA-deficient mouse erythroblasts involves actomyosin and midbody dysregulation and triggers p53 activation. BLOOD, 17 SEPTEMBER 2015 x VOLUME 126, NUMBER 12

5. 宽动态范围曝光模式

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