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使用分子标签(UMT)对单个分子进行准确分析:ThruPLEX® Tag-seq Kit

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年12月12日 来源:Takara

摘要:

  通过带有特别分子标签(UMT)的引物,构建带有分子标记和样品检索引物的NGS文库。包含超过1,600万个特别序列用于在扩增前标记每条DNA片段,以检测低丰度等位基因或计数独立片段。

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ThruPLEX Tag-seq Kit 基于新的ThruPLEX技术,采用带有特别分子标签(UMT)的ThruPLEX引物构建带有分子标记和样品检索引物的Illumina NGS文库。每个试剂盒包含超过1,600万个特别序列用于在扩增前标记每条DNA片段,可以在文库制备、目标富集和数据分析过程中追踪DNA片段,以检测低丰度等位基因或计数独立片段。

ThruPLEX Tag-seq采用ThruPLEX 技术设计及优化,可以1到50 ng DNA起始构建高多样性、高重复性文库。整个流程在单管或单孔中就可完成,只需3步,2小时,无需中间纯化步骤和样品转移,避免了操作误差和样品损失。ThruPLEX Tag-seq Kit 包含所需全部试剂,包括可以多重标记96个样品的检索引物。纯化和定量后,文库可以采用标准Illumina测序试剂和流程在Illumina NGS平台进行测序。同时采用Curio Genomics提供的云服务软件或开源软件进行生物信息学分析,从而快速获得研究结果。

ThruPLEX Tag-seq兼容主流平台实现强有力的目标区域富集,如Agilent SureSelect® and Roche NimbleGen SeqCap® EZ。

图1: ThruPLEX Tag-seq技术流程


 
图2:使用本kit 对30 ng 1% Horizon cfDNA standard,采用 ThruPLEX Tag-seq构建文库。Agilent SureSelect富集目标区域,~5,000X覆盖度测序,采用Curio Genomics生物信息学平台分析数据。采用原始数据分析,EGFR 的突变(黄色点)会被背景误差遮盖(左图)。而在数据分析过程中使用UMT修正误差,突变更容易识别(右图)。

图3:使用本kit 对30 ng(A)或10 ng Horizon cfDNA standard采用ThruPLEX Tag-seq构建文库,240 KB定制panel(NimbleGen SeqCapEZ)富集目标区域,HiSeq 2500 ~5,000X覆盖度测序。Curio Genomics生物信息学分析平台进行数据分析。

*数据来源于Takara Bio Inc.

(http://www.ebiotrade.com/)

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