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全新的蛋白质标签实现灵敏且定量的蛋白检测[新品推荐]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2017年12月21日 来源:生物通

摘要:

  Promega的科学家近日开发出一种新方法,可对细胞内的蛋白质进行轻松检测。这种称为HiBiT的多肽标签可与任何蛋白质相连接,从而实现高度定量且极其灵敏的生物发光检测。这样无需使用抗体,即可利用生物发光对蛋白进行定量。

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Promega的科学家近日开发出一种新方法,可对细胞内的蛋白质进行轻松检测。这种称为HiBiT的多肽标签可与任何蛋白质相连接,从而实现高度定量且极其灵敏的生物发光检测。这样无需使用抗体,即可利用生物发光对蛋白进行定量。

HiBiT只有11个氨基酸,因此很容易与CRISPR/Cas9基因编辑技术相结合,精确插入基因组,从而使研究人员能够在生理相关条件下研究蛋白质。这种方法改变了传统的蛋白检测,不仅节省时间,也提高效率和精度。

检测低丰度蛋白

许多低丰度蛋白在细胞中发挥重要作用,不过难以检测和定量。HiBiT检测是基于生物发光,因而比荧光检测方法(如GFP)更加灵敏。这让研究人员可以检测极低水平的蛋白质。不光灵敏,它也是高度定量的。连续稀释的HiBiT标记蛋白产生了至少7个数量级的线性检测范围。

更加高效地标记

如何追踪内源蛋白质?标记它!如今,最轻松的方法是利用CRISPR/Cas9基因组编辑来插入报告基团,如GFP或萤光素酶。不过,这些报告基团很大,通常需要质粒供体,因此插入效率很低。而HiBiT非常小,只需要单链寡核苷酸(ssODN)供体,插入效率一下子就提高了很多。

无需克隆和等待

若要给目的蛋白加上GFP报告基因,那就需要分子克隆操作,这不仅费时,也很麻烦。相比之下,HiBiT只需要ssODN供体,所有组分都可以直接订购。检测过程也很简单,只需在细胞中加入Nano-Glo HiBiT Lytic Detection Reagent,等待10分钟,将微孔板放在检测仪上即可。这个过程可比抗体检测的封闭、孵育和洗涤快多了。

实时检测活细胞

蛋白质是高度动态的,例如,HIF1α的表达在缺氧条件下增加,而在氧气供应后迅速降解。之前,人们每隔几分钟裂解一次细胞,然后开展Western blot。现在有了HiBiT,研究人员能够实时监控活细胞。有人曾做过实验,在恢复氧气供应后每隔30秒监控HiBiT编辑过的细胞,发现HIF1α-HiBiT的半衰期不到6分钟。如果有生物发光显微镜,还能够实时观察蛋白质处于什么位置。

总的来说,HiBiT标记是一种检测内源性蛋白质的灵敏、可靠且快速的方法。如果你的目标蛋白找不到合适的抗体,或者你已经厌烦了抗体检测,那不妨试试这种新方法吧。(生物通 余亮)


 

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