Nature发布癌症免疫疗法新突破：CRISPR构建更有效的CAR-T细胞

目前CAR-T细胞也不是很完善，由于都是通过逆转录病毒或慢病毒将CAR基因传递到T细胞的基因组内，这种传递方法导致CAR基因会被随机插入到受体细胞的基因组中，从而引发潜在的遗传副作用。来自纪念斯隆—凯特琳癌症中心（MSK）的研究人员利用CRISPR-Cas9技术构建了更有效的第二代CAR-T细胞。

　　

生物通报道：CAR-T全称是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效的新型细胞疗法，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。它的基本原理就是利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞。自从魏泽西事件后，自体免疫治疗的临床应用已被“刹车”，由于监管不力而导致的混乱最后就由这种很有希望的肿瘤治疗方法背了锅。

目前CAR-T细胞也不是很完善，由于都是通过逆转录病毒或慢病毒将CAR基因传递到T细胞的基因组内，这种传递方法导致CAR基因会被随机插入到受体细胞的基因组中，从而引发潜在的遗传副作用。

来自纪念斯隆—凯特琳癌症中心（MSK）的研究人员利用CRISPR-Cas9技术构建了更有效的CAR-T细胞，并在小鼠中增强了肿瘤抑制作用。这指出了CRISPR-Cas9技术在CAR-T细胞治疗中的的潜力，有助于未来癌症免疫疗法的发展。

这一研究成果公布在最新一期（2月22日）Nature杂志上，文章的通讯作者是纪念斯隆—凯特琳癌症中心的Michel Sadelain教授，他致力于对T细胞进行基因改造，是癌症免疫疗法的开拓者之一。对于这项最新成果，他表示，“癌细胞竭力逃脱癌症治疗，因此我们需要CAR-T细胞，这些细胞能与癌细胞相匹配，并抓住它们。这项新发现指出我们可以利用基因编辑技术，提升这些‘有潜力的治疗方法’，我们希望继续探索基因组编辑技术，研发第二代CAR-T细胞疗法。”

在最新这项研究中，研究人员发现CRISPR-Cas9可以定向插入CAR基因，递送到特异性位置，而且这种精确的方法能长期杀死癌细胞，因为它们不会枯竭，这可以避免原来CAR-T细胞疗法的问题，最终确保更安全，更有效的利用中强大的免疫疗法。

研究人员也在小鼠中进行了实验，他们将在急性淋巴细胞白血病的小鼠模型中，编辑过的CAR-T细胞要显著优于常规生成的CAR-T细胞，这对于许多患者来说无疑是一道福音。

目前这一研究组正在计划进行CRISPR技术的第一次临床实验，Sadelain教授希望能最终探讨这种经CRISPR构建CAR-T细胞的安全性和有效性。

目前癌症免疫疗法备受关注，去年JunoTherapeutics公司的JCAR015产品在针对成人复发或难治性B细胞急性淋巴细胞白血病的Ⅱ期临床试验中导致2例患者脑水肿死亡而被叫停。7月12日，FDA在审核JUNO递交的患者知情同意书、试验方案等四项修订材料后排除JCAR015产品本身问题，宣布许可JCAR015继续进行临床试验。JCAR015从试验暂停到恢复用时仅仅6天(包括非工作日)，远超30天的预期,FDA的积极态度显著降低事件对于CAR-T领域的负面影响。普遍认为CAR-T细胞疗法仍是当下最具前景的肿瘤精准疗法，该事件并不影响CAR-T产品市场化进度，第一个产品大概率在2017年上市。

（生物通：万纹）

原文摘要：

Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumour rejection

Chimeric antigen receptors (CARs) are synthetic receptors that redirect and reprogram T cells to mediate tumour rejection1. The most successful CARs used to date are those targeting CD19 (ref. 2), which offer the prospect of complete remission in patients with chemorefractory or relapsed B-cell malignancies3. CARs are typically transduced into the T cells of a patient using γ-retroviral4 vectors or other randomly integrating vectors5, which may result in clonal expansion, oncogenic transformation, variegated transgene expression and transcriptional silencing6, 7, 8. Recent advances in genome editing enable efficient sequence-specific interventions in human cells9, 10, including targeted gene delivery to the CCR5 and AAVS1 loci11, 12. Here we show that directing a CD19-specific CAR to the T-cell receptor α constant (TRAC) locus not only results in uniform CAR expression in human peripheral blood T cells, but also enhances T-cell potency, with edited cells vastly outperforming conventionally generated CAR T cells in a mouse model of acute lymphoblastic leukaemia. We further demonstrate that targeting the CAR to the TRAC locus averts tonic CAR signalling and establishes effective internalization and re-expression of the CAR following single or repeated exposure to antigen, delaying effector T-cell differentiation and exhaustion. These findings uncover facets of CAR immunobiology and underscore the potential of CRISPR/Cas9 genome editing to advance immunotherapies.