BioTechniques:高效纯化细胞外囊泡的新方法

【字体: 时间:2017年09月07日 来源:生物通

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  细胞外囊泡(EV)在长距离的细胞间通讯中发挥作用,并且是有潜力的生物标志物,因此,近年来逐渐成为研究的热点。不过,EV的高效纯化仍是个挑战。在《BioTechniques》的8月刊上,研究人员报道了一种获得高纯度EV的新方法。

生物通报道  细胞外囊泡(EV)在长距离的细胞间通讯中发挥作用,并且是有潜力的生物标志物,因此,近年来逐渐成为研究的热点。不过,EV的高效纯化仍是个挑战。在《BioTechniques》的8月刊上,研究人员报道了一种获得高纯度EV的新方法。

细胞外囊泡近来一直是人们关注的焦点,因为它有望作为生物标志物和治疗剂。许多研究都致力于开发纯化EV的标准化方法,然而,研究人员仍然面临纯度的问题。目前的分离和纯化操作主要是基于EV的物理或生化性质。

差速离心法是EV分离的金标准方法,它根据大小和密度的差异将EV与其他组分分离,且经常与蔗糖密度梯度离心结合使用。分子排阻层析、纳米过滤和PEG沉淀也是根据大小来分离EV。此外,根据EV表面分子的相互作用,可采取亲和捕获的方法。不过,这些方法分离出的EV通常不大纯,存在蛋白质复合物或非EV RNA的污染。

考虑到EV带负电荷,贝尔格莱德大学的研究人员决定尝试一下离子交换层析(IEC)。他们以羊水作为研究对象,在差速离心之后通过离子交换层析或蔗糖密度梯度离心来分离EV。为了评估EV的纯度,他们监测总蛋白含量、已知污染物(白蛋白和IgG)、以及EV标志物(CD63、CD81和CD9)的分布。

通过电泳和凝集素印迹/免疫印迹的分析,研究结果表明,阴离子交换层析的方法可以去除主要的可溶性污染物,从CD63/CD81/CD9阴性和CD63/CD81/CD9阳性组分的总蛋白/白蛋白分布上可见差异。作者认为,离子交换层析在EV分离上的效果优于蔗糖密度梯度离心。

作者还表明,尽管这种离子交换层析的方法是利用羊水来验证的,但由于细胞外囊泡都带有负电荷,故这种方法同样适用于其他来源的样本。(生物通 薄荷)

原文检索

Ion-exchange chromatography purification of extracellular vesicles

BioTechniques, Vol. 63, No. 2, August 2017, pp. 65–71

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