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拒绝金属离子脱落,无需繁琐再生,新型镍柱,你值得拥有!

【字体: 时间:2020年11月02日 来源:基因有限公司

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  为了克服传统填料的金属离子脱落,提高对螯合剂和还原剂的耐受程度,一款新型的镍离子亲和层析填料贴心上市。

His-Tag标签在重组蛋白质的表达、鉴定和纯化中,无疑是广泛被应用和偏爱的一款标签,小小六个组氨酸标签极大得方便了重组蛋白质的检测和纯化,成为了蛋白质研究和蛋白质工程的有力工具。His-Tag重组蛋白的纯化常用方法是使用金属离子螯合层析,又称固定化金属离子亲合层析(Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC),最早由Porath等人提出后,因为其快速方便的纯化效果,迅速成为了His-Tag重组蛋白的主流纯化手段。

传统的IMAC纯化填料最常用两种配基:次氮基三乙酸(NTA)和亚氨基二乙酸(IDA)。通常情况下IMAC是比较稳定的,但螯合剂和还原剂会导致其金属离子脱落。细胞培养,尤其是CHO或者昆虫细胞等真核细胞培养过程中,通常会加入EDTA等螯合剂。另外也有研究表明例如E.coli 在某些高压情况下会产生高特异性的金属螯合剂,导致 His-Tag 融合蛋白纯化的纯度和产量大大降低;DTT(二硫苏糖醇)是一种还原剂,可保护蛋白质的游离巯基不被氧化,但它可还原IMAC琼脂糖的金属离子,通常会使琼脂糖的颜色变为棕色。因此在使用以上两种传统的IMAC填料进行纯化 His-Tag 融合蛋白的实验之前,通常需要提前进行缓冲液的置换来去除螯合剂或者还原剂。

因此,为了克服传统填料的金属离子脱落,提高对螯合剂和还原剂的耐受程度,一款新型的镍离子亲和层析填料贴心上市。

WorkBeads™ NiMAC:

▪ 可耐受20 mM EDTA螯合剂和 20 mM DTT还原剂,免去样本前处理
▪ Ni2+离子结合牢固,脱落微乎其微
▪ 无需繁琐的再生步骤,可直接进行NaOH清洗
▪ 高达40mg/ml动态结合载量
▪ 重复性高,纯度高
▪ 可预装可散装

一、WorkBeads™ NiMAC 可耐受20 mM EDTA和 DTT,无需去除样本中螯合剂和还原剂

在上样样本以及缓冲系统中包含20 mM EDTA和 20 mM DTT的情况下,WorkBeads™ NiMAC 和普通Ni-NTA 镍柱纯化结果相比,更加耐受螯合剂和还原剂,产物回收率大大提高。

二、Ni2+离子脱落微乎其微

在上样样本以及缓冲系统中包含20 mM EDTA和 20 mM DTT的情况下,WorkBeads™ NiMAC 和普通Ni-NTA 镍柱上样前后的颜色比较,可以看出,WorkBeads™ NiMAC更加耐受螯合剂和还原剂,Ni2+离子的脱落微乎其微,而Ni-NTA在同样条件下,颜色变淡,Ni2+离子脱落明显。

三、Ni MAC无需繁琐的再生步骤,可直接进行NaOH清洗,步骤大大简化

传统Ni柱清洗再生需9步:

NiMAC清洗仅需4步:

四、动态结合载量高达40mg/ml填料

五、蛋白表达量低也不怕,NiMAC可实现大体积样本纯化


WorkBeads™ NiMAC更多产品资料及试用装申请,请扫码联系产品专员。更多多种金属离子(镍/铜/钴/锌),不同配基的IMAC,帮助您选择更合适的纯化填料。

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