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活性氧(ROS)检测方法:个人型新一代流式细胞仪

【字体: 时间:2020年07月15日 来源:基因有限公司

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  今天小编为大家介绍新一代个人型双荧光通道细胞分析仪—Moxi Go II。这款仪器小巧轻便,操作简单,无论是FACS的专家还是刚上手的小白,都能轻松在自己的实验台上顺利完成细胞内ROS的精准检测。

    活性氧(Reactive oxygen species,ROS),是生物有氧代谢的副产物,包括氧离子、过氧化物和含氧自由基等。越来越多的研究证明,ROS是多个信号通路的信使分子,可能触发或者直接与包括癌症、神经退行性疾病,纤维化,心血管等疾病相关。监测ROS的水平,将有助于阐明疾病机理并可能引入新的治疗方法。

    流式细胞荧光分选技术(FACS)主要利用细胞内的荧光和散光(LS)信号对悬浮的活细胞自动计数、筛选。其最主要的元件包括一个激光器和两个检测器(一个用于荧光,一个用于LS)。荧光探针的发展使得该技术可以应用于检测细胞内ROS,并由于结果准确,重复性高,已经成为监测活性氧的主要技术。

    然而,传统流式细胞仪通常作为平台仪器需要满足众多实验需求,排队周期过长,操作复杂,限制了科研人员的使用。今天小编为大家介绍新一代个人型双荧光通道细胞分析仪—Moxi Go II。这款仪器小巧轻便,操作简单,无论是FACS的专家还是刚上手的小白,都能轻松在自己的实验台上顺利完成细胞内ROS的精准检测。我们来看一组实验。

    化合物TBHP(叔丁基过氧化氢)能够诱导细胞的氧化应激反应,产生活性氧;NAC( N-乙酰半胱氨酸),则是一种常用的抗氧化剂,能够清除细胞内的自由基。实验采用Thermo CellROX® Assay Kit,针对Jurkat E6-1细胞,设计三组对照试验:1. 阴性对照(健康细胞不处理) 2. TBHP处理的细胞 3. NAC预保护、TBHP 处理的细胞。使用Moxi Go II检测每组细胞活性氧生成情况。结果输出界面如下:

    由图知Moxi Go II支持输出散点图(CellROX® Orange荧光强度 vs直径)和直方图(细胞数量 vs CellROX® Orange荧光强度)。左侧两张图清楚显示,相比健康对照组(TBHP-/NAC-,灰)细胞,TBHP(TBHP+/NAC-,紫/红)处理组明显发生荧光的右移,指示TBHP的活性氧诱导功能。右侧两张图表明NAC预处理组(TBHP+/NAC+, 灰)相比单独用TBHP (TBHP+/NAC-,紫/红)处理组荧光左移,与NAC对TBHP诱导的ROS的预清除理论结果相符。

    相同的试验在HEK-293细胞中重复得到同样准确的结果:

    能够得到这样漂亮的结果,是因为Moxi Go II具备大流式的核心组件:一个高强度的488nm (Blue) 激光器, 2个PMT检测器(525/45nm,561nm/LP)。兼容常用荧光染料,像藻红蛋白(PE),碘化丙啶(PI)和RFP(dsRed或tdTomato)等。

    Moxi GO II以行业标准的FCS 3.1格式保存数据(可通过USB随时随地通过外部驱动器访问),因此可以轻松地将其导入流式分析软件中,以进行更高级的数据可视化和分析。下图针对HEK-293(左)和Jurkat E6-1(右)细胞系,简洁地显示了三种ROS状态(红色:TBHP-/NAC-,蓝色:TBHP+/NAC+和橙色:TBHP+/NAC-)。以这种形式呈现的ROS诱导剂(TBHP)和抗氧化剂(NAC)的应用效果可以同时清晰地显现出来。

    实际上,除了ROS检测,Moxi Go II还可以检测细胞活性、细胞凋亡、转染效率、线粒体膜电位、胞内蛋白、细胞表面蛋白等。它的制造商美国ORFLO公司是一家专业的细胞分析仪器研发和制造商,一直为细胞和蛋白质分析行业开发功能强大但操作简单的仪器。基因有限公司是ORFLO的中国区合作伙伴,为你提供专业的技术咨询和产品服务。如果您想进一步了解更多相关信息,欢迎索取个人型双荧光通道细胞分析仪—Moxi Go II的详细资料>>

References

1. Turrens, J. F. Mitochondrial formation of reactive oxygen species. J. Physiol. 552, 335–344 (2003). 2. Bazhin, A. V, Philippov, P. P. & Karakhanova, S. Reactive Oxygen Species in Cancer Biology and Anticancer Therapy. Oxid. Med. Cell. Longev. 2016, 4197815 (2016).
3. Waris, G. & Ahsan, H. Reactive oxygen species: role in the development of cancer and various chronic conditions. J. Carcinog. 5, 14 (2006).
4. He, F. & Zuo, L. Redox Roles of Reactive Oxygen Species in Cardiovascular Diseases. International Journal of Molecular Sciences 16, (2015).
5. Seidman, M. D. et al. Age-related hearing loss and its association with reactive oxygen species and mitochondrial DNA damage. Acta Otolaryngol. 124, 16–24 (2004).
6. Richter, K. & Kietzmann, T. Reactive oxygen species and fibrosis: further evidence of a significant liaison. Cell Tissue Res. 365, 591–605 (2016).
7. CellROX® Green and CellROX® Orange Flow Cytometry Assay Kits – User Manual - https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/cellrox_green_orange_flow_cyt_assays_man.pdf

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