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一天之内,获得单细胞单拷贝水平的RNA FISH结果!

【字体: 时间:2020年09月11日 来源:基因有限公司

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  Stellaris™ RNA FISH由于不受抗体的限制,在肿瘤、病毒、神经疾病、植物、微生物及特殊物种研究领域有着独特的优势,且对于时下热门的lncRNA、miRNA、cirRNA等不表达蛋白的非编码RNA,也是很好的选择。

随着近年来转录组研究迅猛,以及高水平杂志对数据准确性的要求越来越高,要确定前期筛选靶标的表达量、分子功能及作用机制,必须经过原位的验证。对靶基因进行组织学水平或者细胞学水平的单分子RNA 原位杂交可以实现对研究对象的精准原位定量。越来越多的研究者采用RNA FISH,除了是对传统蛋白水平IHC/IF和DNA水平DNA FISH原位验证的有力补充,Stellaris™ RNA FISH由于不受抗体的限制,在肿瘤、病毒、神经疾病、植物、微生物及特殊物种研究领域有着独特的优势,且对于时下热门的lncRNA、miRNA、cirRNA等不表达蛋白的非编码RNA,也是很好的选择。

Stellaris™ RNA FISH---单分子水平的RNA原位、多重、定量技术

传统的RNA原位杂交技术局限于灵敏度、特异性不高,而大部分RNA在细胞中的拷贝数都很少,所以高灵敏度的原位杂交技术就显得尤其关键。此外,传统的比如地高辛的方法,实验操作上也很繁琐耗时,通常需要五天左右的时间。而Stellaris™ RNA FISH技术不仅可以达到单细胞单拷贝级别灵敏度,而且操作简单快速,仅需一步杂交,一天内即可完成单分子RNA FISH检测!

一步法杂交

Stellaris RNA FISH 通过48 个荧光标记的probe与同一条靶标RNA在半连续的位置结合;每条RNA结合多根荧光probe之后,在普通宽场显微镜下形成一个独立的光斑(衍射极限),通过观察光斑位置及个数,即可完成单分子水平的RNA定位及定量。仅需一步杂交,即可完成smFISH检测。

操作简单,无需特殊处理,仅需4步:1. 准备样品 2. 恒温杂交 3. 样品清洗  4. 图像采集

探针设计和DesignReady探针组

Biosearch Technologies 提供在线探针设计软件,针对目标RNA 设计特异的Stellaris RNA FISH 探针组。

同时,针对常见RNA序列,我们也提供DesignReady探针组:

其预设计好,并经过严格的生物信息学分析,能够很好的保证探针特异性。
多数采用以下Biosearch特色的高效荧光染料进行标记:CAL Fluor® Red 590, Quasar® 570, CAL Fluor Red 610, 和Quasar 670。

DesignReady探针组列表

https://www.biosearchtech.com/products/rna-fish/designready-stellaris-probe-sets

快点击查看您的基因是否是DesignReady!

Stellaris所有在库并经过验证(DesignReady)的探针目前有4476种。涉及人、小鼠、大鼠、中国仓鼠、斑马鱼、线虫、Zika病毒、果蝇、酵母菌、大肠杆菌、猕猴、猪、牛、犬、鸡、马、猫、绵羊、青蛙、报告基因等19个物种的多种癌症相关基因、重要LncRNA及其它mRNA。

DesignReady部分癌症相关重要Targets:

癌症研究应用界面:
https://www.biosearchtech.com/support/education/stellaris-rna-fish/applications/cancer-RNA-FISH

DesignReady部分重要LncRNA Targets:

LncRNA研究应用界面:
https://www.biosearchtech.com/support/education/stellaris-rna-fish/applications/lnc-rna-fish

Stellaris RNA FISH单分子荧光原位杂交的优势

传统的原位杂交技术除了灵敏度受限,还不能做多重,无法定量,操作上也比较耗时和复杂,Stellaris RNA FISH单分子荧光原位杂交却很好地解决了这些问题。
 
灵敏度高:可检测单细胞、单拷贝RNA分子; 
特异性好:多组探针设计,潜在脱靶效应或少数RNA降解可忽略,有效避免假阳性
操作简单:无抗体抗原结合的繁琐步骤;一天即可得到结果
适用性广:无物种限制(植物、动物、微生物等);无样本限制(细胞、组织、石蜡切片(FFPE)、全组织…);无需特殊仪器与配套试剂
探针设计灵活,荧光标记灵活
多重共定位:多靶点RNA共定位;RNA与蛋白共定位;寡核苷酸探针与其它原位技术兼容性好
简便、快速、开放的实验体系:仪器和试剂开放,无需特殊仪器与配套试剂,可自行配置试剂,也可购买其优化的杂交与洗涤Buffer。

Stellaris技术应用

• 观察RNA在细胞和组织中的空间定位
• 运用多重检测,研究不同RNA分子的共表达
• 研究不同细胞或组织中同一Target表达的空间差异性
• 研究不同时间点/段病毒侵染与转移的情况
• 与IF、IHC、ICC或DNA FISH等结合,研究同一Target RNA、DNA及其蛋白表达与定位的时空差异(Biosearch提供RNA FISH与IF同时进行的Protocol) 

Stellaris™ RNA FISH出版信息:

Stellaris RNA FISH技术近年来已得到了越来越多的科研工作者认可,引用的paper超过33%发表于Nature、Science、Cell及其子刊上!

Publication Highlights

Post-transcriptional Modifications Contribute to the Upregulation of Cyclin D2 in Multiple Myeloma.
Misiewicz-Krzeminska et al. Clinical Cancer Research. 2016. url: https://dx.doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-14-2796

G1/S Inhibitors and the SWI/SNF Complex Control Cell-Cycle Exit during Muscle Differentiation.
Ruijtenberg et al. Cell. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2015.06.013

Genome-wide profiling of p53-regulated enhancer RNAs uncovers a subset of enhancers controlled by a lncRNA.
Leveille et al. Nature Communications. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncomms7520

Niche appropriation by Drosophila intestinal stem cell tumours.
Patel et al. Nature Cell Biology. 2015. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncb3214

FuseFISH: robust detection of transcribed gene fusions in single cells.
Semrau et al. Cell reports. 2014. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.celrep.2013.12.002

Proteostatic Control of Telomerase Function through TRiC-Mediated Folding of TCAB1.
Freund et al. Cell. 2014. url: https://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2014.10.059

Single-molecule transcript counting of stem-cell markers in the mouse intesting.
Itzkovitz et al. Nature Cell Biology. 2011. url: https://dx.doi.org/10.1038/ncb2384

请访问Citation Center 网站获取完整的文献列表信息。

https://www.biosearchtech.com/support/resources/stellaris-citation-center

想发高分文章,想要漂亮的图片,怎能少了Stellaris单分子荧光原位杂交!

一天之内的RNA FISH,您get到了吗?

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基因有限公司为LGC Biosearch授权一级代理,想进一步了解Stellaris RNA FISH技术及更详细的产品信息,敬请留言或直接联系基因有限公司。

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