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提取的核酸浓度太低了,满足不了下游实验要求怎么办?

【字体: 时间:2020年09月23日 来源:基因有限公司

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  我们在进行分子生物学实验的时候,通常会对生物大分子的浓度有一定的要求,比如您要进行转染实验,加入细胞的质粒浓度要求在1 µg/µl,可是您抽提的质粒浓度只有200 ng/µl,这时候该怎么办呢?如何将质粒浓度浓缩到理想的浓度呢?

我们在进行分子生物学实验的时候,通常会对生物大分子的浓度有一定的要求,比如您要进行转染实验,加入细胞的质粒浓度要求在1 µg/µl,这样才能得到比较高的转染效率。可是您抽提的质粒浓度只有200 ng/µl,这时候该怎么办呢?如何将质粒浓度浓缩到理想的浓度呢?

常用的方法有两种:乙醇沉淀法和离心浓缩法。

乙醇沉淀法:

操作步骤:

1. 估算含有质粒溶液的体积V,加入V/9体积的3M NaAc ,使得NaAc终浓度为0.3M
2. 加入2倍体积的冷无水乙醇,冰上或者-20℃孵育20min
3. 最大离心速度(>13000rpm)离心10min,弃去上清
4. 用75%乙醇洗涤2次
5. 室温晾干
6. 加入适当体积的水或TE buffer 溶解即可

(以上步骤来自分子克隆)

经过一系列的复杂操作,再去做一下核酸定量检测,你往往会发现,浓度比理想的要低很多!这是因为在整个过程中比较容易产生核酸的损失,比如乙醇沉淀步骤没有将核酸完全析出、离心步骤没有完全将核酸完全离心下来、去除上清时不小心将核酸吸出等。

离心浓缩法:

原理:借助于真空离心浓缩仪,将待浓缩的核酸样品放入离心机中,用真空泵提高离心机中的真空度,在低压下核酸溶液的沸点降低,在室温下即可快速挥发以达到浓缩核酸溶液的目的。

操作步骤:

1. 将样品管放入离心机中
2. 设置离心机转速、时间,点击运行
3. 打开真空泵
4. 浓缩结束后取出样品即可

采用离心浓缩法具有更大的优势:

1. 操作简单,避免复杂操作带来样品损失及污染
2. 浓缩速度快,100µl的待浓缩样品浓缩至20µl大约需要40min
3. 成功率高,整个过程核酸分子均在EP管中,避免核酸损失
4. 更好的保护核酸,常温低压下进行核酸浓缩,避免核酸降解

因此,离心浓缩法越来越受到用户的青睐!

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