NanoDrop A280法直接进行纯化蛋白的准确定量评估

NanoDrop One A280法可直接进行纯化蛋白的准确性定量，上样体积小，无需耗材，无需浓度稀释，方便快捷。

NanoDrop One/Onec 超微量紫外-可见分光光度计具有多种预编程的蛋白质应用，包括蛋白质A280、蛋白芯片、蛋白质A205 和比色分析（如Bradford、BCA、Lowry和Pierce 660），使生命科学家能够量化蛋白质样品（图 1）。 本文主要介绍了NanoDrop One 超微量分光光度计在使用蛋白质A280应用测量牛血清白蛋白 (BSA) 制剂时的性能。通过与Thermo Scientific Evolution 300 紫外-可见分光光度计测量值进行比较，在仪器的动态范围内对NanoDrop One A280法直接测定纯化蛋白的准确性进行评估，结果表明NanoDrop One 超微量分光光度计在广泛的蛋白质浓度范围内具有高度的准确度和出色的线性。

图1：NanoDrop One蛋白测定界面。

NanoDrop One 超微量分光光度计可以准确定量浓度范围为 0.06 mg/mL 至 820 mg/mL 的BSA标准品（即吸光度介于 0.04A 和 550A 之间）的纯化蛋白质制剂。NanoDrop One 获得专利的样品滞留系统和自动调整光程长度使用户无需稀释、无需昂贵的耗材即可测量大范围的浓度。通过将NanoDrop One获得的蛋白质测量值与基于比色皿的台式Thermo Scientific Evolution 300 紫外-可见分光光度计测量值进行比较，对NanoDrop One的准确性在仪器的动态范围内进行评估。

首先，用磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 稀释BSA标准溶液 (Sigma Aldrich, #A7284) 来制备一系列0至290 mg/mL的溶液。然后，使用Evolution 300分光光度计1cm石英比色皿 (Starna Cells, 1-Q-10) 测量280 nm处的吸光度来验证BSA浓度。超出Evolution 300分光光度计吸光度检测限的样品用PBS稀释，并根据需要再次测量。通过吸光度值用于手动计算未稀释 BSA溶液的浓度。接着，在NanoDrop One上使用A280法直接测定相同样品浓度，用 PBS 溶液做空白，每次重复测量使用新的2 µL BSA溶液至基座上。最后，对2台仪器测量的数据进行比较来评估NanoDrop One A280法直接测定纯化蛋白的准确性。

为了计算每个样品的浓度，NanoDrop One 软件使用在280 nm 处测得的吸光度和6.7的质量消光系数来计算蛋白质浓度。分别给出 Evolution 300 和 NanoDrop One 超微量分光光度计的平均浓度、标准偏差和变异系数值（表 1），然后绘制并分析这些值来进行比较（图 2 和图 3）。

表1：分别在 NanoDrop One 和 Evolution 300 上测量了9种不同浓度的 BSA 制剂，每个浓度测10次重复。

图 2：绘制了最终的 BSA 浓度，并比较了 NanoDrop One 和 Evolution 300 分光光度计之间的线性度。 回归线表明在两种仪器上获得的蛋白质浓度之间存在很强的相关性。

图 3：绘制了 NanoDrop One 和 Evolution 300 低浓度范围内的计算浓度，并比较了线性。 NanoDrop One 在低浓度范围内观察到出色的线性。

将NanoDrop One超微量分光光度计与Evolution 300分光光度计上测定的相同样品的数值进行分析比较，表明NanoDrop One 超微量分光光度计在广泛的蛋白质浓度范围内具有高度的准确度和出色的线性。图2测试的全范围的蛋白质浓度以及图3测试的低浓度范围的蛋白质浓度，进行比较分析表明NanoDrop One测试计算的R2值与Evolution 300获得的参考值具有很强的相关性。同时，在整个操作流程中，NanoDrop One上样体积较小，只需1-2µL样品即可。另外，NanoDrop One具有创新的自动量程光程长度技术及独特的测量基座和宽动态范围，因此对高浓度的样品也可以直接进行检测，无需稀释，无需昂贵的耗材。再加上易于使用的预置方法和集成的 Android平板电脑进一步简化了蛋白质浓度检测工作流程，从而使样品测量更加简便、快速、经济实惠。

专利号：Patents US6628382 & US6809826

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