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如何选购激光捕获显微切割系统?听听专家怎么说

【字体: 时间:2021年09月08日 来源:生物通

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  在选择激光捕获显微切割系统时,我们需要考虑哪些功能?本文介绍了一些专家建议。

激光捕获显微切割(LCM)系统的出现,让您能够从组织样品中获得一小块感兴趣的区域(比如细胞团块、单细胞或细胞核),用于后续的研究。从特定位置收集细胞或组织,这种能力将会造福那些需要空间信息的研究,比如肿瘤内不同细胞类型的研究。那么,在选择激光捕获显微切割系统时,我们需要考虑哪些功能?本文介绍了一些专家建议。

双重的激光器

赛默飞的Arcturus XT激光捕获显微切割系统是一种独特的仪器,可提供两种激光功率。产品经理Troy Stearns表示:“温和的红外激光器可保留捕获细胞和周边细胞的组织形态和遗传物质,让研究人员能够轻松验证捕获的材料,同时保留生物分子的完整性,以便支持肿瘤学和神经学等不同领域的研究。功率更大的紫外激光器则适合高密度组织的切割和大量细胞的捕获。”两种激光器赋予您实验准备时的灵活性,可推动下游分析的改善。

在Arcturus XT的基础之上,赛默飞准备在2021年第四季度推出Arcturus Cellect激光捕获显微切割系统。在制备LCM样品时,Stearns指出切割和包埋步骤对于维持RNA质量至关重要。“研究人员应使用整个相邻切片或切割大面积的切片(>1000个细胞)进行RNA分离,”他说。“有了大量的RNA,人们就可以评估RNA的数量和质量,以确保获得高质量的RNA。”

Stearns指出,评估RNA质量对于长期保存的FFPE样品特别重要,因为这些样品可能包含化学修饰或RNA片段化,为下游的基因表达分析带来不同的挑战。“最初的石蜡包埋制备和储存会显著影响RNA的质量,”他说。“随着时间的推移RNA不断降解,这又给FFPE样品带来了更多的挑战。”

移动激光,而不是样品

在写字时,是移动笔容易,还是移动纸容易?显然,移动笔比移动纸更快更容易,而笔就相当于我们的激光。因此,与传统的激光捕获显微切割系统不同,徕卡在激光捕获显微切割中选择移动激光,而不是移动样品。

徕卡目前提供了两种激光捕获显微切割系统:Leica LMD6和Leica LMD7,这两款产品的区别主要在于激光。Leica LMD6是切割大脑、肝脏或肾脏等软组织标准应用的理想工具。而Leica LMD7则可以理想地切割任何类型、大小或形状的组织。LMD7提供了更高的激光功率和更大的灵活性,可处理更多样品类型。

徕卡科研显微镜和样品制备部门的经理Falk Schlaudraff表示:“激光移动和重力收集的组合让我们的系统与众不同。移动激光进行切割提供了高的精度和速度,而且样品保持固定,也便于人眼观察切割过程。”

徕卡平台通过基于重力的非接触式方法收集样品,也就是切割后的组织落入培养皿中,供进一步分析使用。这种方法有助于后续的高通量分析。“将来自异质性组织的单个细胞或细胞核直接分离到96孔板中,为下游的分析做准备,也为空间多组学分析提供了自动化的工作流程,”Schlaudraff说。“重力收集这种方法对活细胞也很温和,因为收集容器可以预先装满培养基。”

将您的样品弹出来

尽管通过重力收集样品很有效,但蔡司的激光显微切割系统采用了另一种非接触式的样品采集方法。在进行激光显微切割时,先在屏幕上标记一个目标,再启用激光将其从不需要的组织中分离出来。接着,激光脉冲会无接触地将目标向上“弹射”至一个用于后续分析的收集容器内。

蔡司科研显微镜解决方案部门的经理Nathan Lane指出,蔡司PALM MicroBeam IV的一个显著特点是它能够实现无接触且无损伤的样品收集,促进“更加可靠的样品提取、下游RT-PCR分析和单细胞分离”。

根据Lane的说法,这种通过压力弹射装置对抗重力的收集方法还有一个优点,那就是提高了收集效率,避免较小的样品在依靠重力采集时,因表面张力的存在而下落受阻。“解剖物不一定能轻松掉下来,因为颗粒直径、单细胞和细胞簇等因素会产生限制,”他说。

更多的建议

根据您实验的具体情况,您可能会更青睐倒置显微镜(如蔡司)或正置显微镜(如徕卡)。但无论选择何种系统,您都需要花时间来优化操作方案,以获得优质而可靠的结果。

犹他大学的病理学助理教授Chris Fillmore正使用蔡司的Palm MicroBeam系统,从各种癌症类型中分离肿瘤细胞。后续主要用于新一代测序(NGS)和单细胞应用。“我们不得不花大量时间来优化实验条件,以实现最佳的样品捕获,但这些时间是值得的,能够带来最佳的产量,”Fillmore说。

Lane认为,在样品制备时需要特别注意细节。俗话说,“garbage in, garbage out”。样品制备过程对获得高质量的结果至关重要,无论是RNA、DNA还是蛋白质。“在整个流程中保留各种成分是关键。换句话说,你在每一步都可能会丢失成分,”他说。

同样地,Schlaudraff也建议研究人员“保护感兴趣的生物分子——花时间去建立一个操作方案,让您能够识别显微目标,并防止生物分子的降解和变化”。细致的样品处理,再加上明确的实验目标,将帮助您踏上成功的激光捕获显微切割之旅。

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