利用基于CRISPR的诊断方法快速特异性检测口腔病原体

在与美国牙科、口腔和颅面研究协会第53届年会和加拿大牙科研究协会第48届年会同时举行的IADR第102届大会上，提出了一项旨在开发适用于护理点环境的低成本、快速检测技术，用于大规模检测和筛选口腔微生物的研究。

　　

一项旨在开发低成本，快速检测技术，用于适用于护理点环境的口腔微生物的大规模检测和筛选的研究，于2024年3月13日至16日在美国新奥尔良举行的美国牙科，口腔和颅面研究协会第53届年会和加拿大牙科研究协会第48届年会同时举行。

该研究由ADA Forsyth研究所的Batbileg Bor, Cambridge, MA, USA，量身定制了基于crispr - cas的新型诊断平台Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking (SHERLOCK)，用于口腔细菌病原体和人乳头瘤病毒(HPV)核酸的物种特异性检测。研究人员开发了一种能够生成适合SHERLOCK的引导rna和物种特异性基因引物的计算管道。这些构建物是通过无细胞生物合成系统合成的，通过报告rna的荧光读数实验验证了它们的特异性和敏感性。

该研究实现了口腔细菌在单分子范围内的检测，在唾液中发现的脱靶DNA存在的情况下保持特异性。此外，该方法还可用于直接从未处理的唾液样本中检测常见的口腔病原体(如牙龈假单胞菌、具核假单胞菌)。在对30例患者唾液样本进行测试后，检测结果与qPCR和16S rRNA测序等其他检测方法完全一致。作为原理证明，研究人员还从gDNA背景中特异性检测了HPV株6、11、16、18、33和35。

这种检测口腔病原体的方法具有高度可扩展性，并且可以很容易地优化，以便在护理点环境中实施。检测大约需要35分钟或更短时间，成本极低，不需要特殊技能或技术即可运行。由于SHERLOCK专门针对核酸序列，因此未来的检测可以开发用于检测其他微生物(真菌和古生菌)以及人类基因产物。

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