基于CRISPR的口腔病原体快速检测诊断方法

2024年3月13日至16日，在美国洛杉矶新奥尔良举行的美国牙科、口腔和颅面研究协会第53届年会和加拿大牙科研究协会第48届年会同时举行的IADR第102届大会上，提出了一项旨在开发一种低成本、快速的检测技术，用于适用于护理点环境的口腔微生物的大规模检测和筛选。

　　

在2024年3月13日至16日的美国洛杉矶新奥尔良，美国牙科、口腔和颅面研究协会第53届年会与加拿大牙科研究协会第48届年会同期举行的IADR第102届大会上，一项创新性研究引起了与会者的广泛关注。该研究的核心目标是开发一种低成本、高效率的检测技术，旨在实现适用于护理点环境的口腔微生物的大规模检测和筛选。

在2024年3月15日星期五上午8点举行的“颅面诊断科学”口腔会议上，Batbileg Bor及其团队来自ADA Forsyth研究所，位于美国马萨诸塞州剑桥，他们提出的研究成果——“使用基于CRISPR的诊断快速特异性检测口腔病原体”——为口腔健康领域的诊断技术带来了革命性的进展。这项研究利用了基于CRISPR-Cas的新型诊断平台Specific High-Sensitivity Enzymatic Reporter Unlocking (SHERLOCK)，专门针对口腔细菌病原体和人乳头瘤病毒(HPV)的核酸进行物种特异性检测。

研究团队开发了一种创新的计算管道，用于生成适合SHERLOCK平台的引导RNA和物种特异性基因引物。这些构建物通过无细胞生物合成系统合成，并在实验中通过报告RNA的荧光读数验证了它们的特异性和敏感性。这一突破性的检测技术实现了在单分子水平上对口腔细菌的检测，即使在唾液中存在脱靶DNA的情况下，也能保持高度的特异性。

此外，该检测方法还展示了其在直接检测未处理唾液样本中的常见口腔病原体（如牙龈假单胞菌、具核假单胞菌）方面的潜力。在对30例患者唾液样本进行的测试中，该检测技术的结果与其他传统检测方法（如qPCR和16S rRNA测序）完全一致，验证了其准确性和可靠性。作为原理证明，研究人员还成功地从gDNA背景中特异性检测出了HPV的多个株系，包括6、11、16、18、33和35。

这项基于SHERLOCK平台的检测技术具有极高的可扩展性，可以轻松优化以适应护理点环境的实施。检测过程大约需要35分钟或更短时间，成本极低，且无需特殊技能或技术即可运行。由于SHERLOCK技术专门针对核酸序列，未来的检测方法还可以开发用于检测其他类型的微生物（如真菌和古生菌）以及人类基因产物，为口腔健康和疾病管理提供了一个全新的视角和工具。这项研究的成功不仅为口腔微生物的快速、准确检测提供了可能，也为全球范围内的口腔健康诊断和治疗带来了新的希望。