嗜碱性粒细胞在皮肤致敏驱动肺部炎症中的关键作用及机制研究

本文系统探讨了嗜碱性粒细胞（basophils）在特应性皮炎（AD）向哮喘发展过程中的核心作用。研究通过构建嗜碱性粒细胞缺陷（Mcpt8Cre）小鼠模型，证实嗜碱性粒细胞通过促进皮肤屏障破坏、白介素-4（IL-4）产生和过敏原特异性免疫球蛋白E（IgE）形成，驱动皮肤接触的卵清蛋白（OVA）致敏，进而诱发肺部炎症。该研究创新性地将嗜碱性粒细胞在致敏期的作用与其在效应期的功能相分离，为预防过敏共病症提供了新的策略视角。

　　

嗜碱性粒细胞在皮肤介导的致敏过程中驱动后续肺部炎症

背景

特应性皮炎（AD）和哮喘是流行病学相关的过敏共病症，两者均以升高的系统性免疫球蛋白E（IgE）水平和2型免疫为特征。嗜碱性粒细胞通过产生白介素-4（IL-4）在这些反应中发挥关键作用，IL-4对IgE合成和过敏性炎症至关重要。然而，嗜碱性粒细胞在AD向哮喘进展中的具体影响尚不清楚。

方法

研究利用嗜碱性粒细胞缺陷的Mcpt8Cre小鼠和暂时性嗜碱性粒细胞耗竭小鼠，建立AD模型。通过局部应用维生素D类似物MC903诱导警报素胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP），产生AD样症状。同时，局部应用卵清蛋白（OVA）作为模型过敏原，以追踪过敏原特异性免疫反应。通过分析生发中心反应确定过敏原特异性抗体形成，测量血清抗体浓度以及脾脏和肺部嗜碱性粒细胞的IgE负载。进一步在过敏反应和过敏性肺部炎症模型中攻击经皮肤致敏的小鼠。

结果

研究结果表明，嗜碱性粒细胞促进皮肤屏障完整性丧失、过敏原特异性IgE形成以及随后的过敏反应。在致敏期间选择性耗竭嗜碱性粒细胞显著降低了IgE依赖性过敏反应和肺部炎症。在受到攻击的肺部，炎症和嗜酸性粒细胞增多的减少伴随着趋化因子CCL17和CCL24水平的降低，这两种趋化因子分别吸引Th2细胞和嗜酸性粒细胞。值得注意的是，致敏期间嗜碱性粒细胞耗竭不影响^Il4和^Il13的表达，但在永久缺乏嗜碱性粒细胞的小鼠中这些细胞因子表达降低。

结论

研究发现嗜碱性粒细胞促进IgE形成和对皮肤接触过敏原的肺部致敏，并驱动继发性过敏原诱导的肺部炎症。研究将嗜碱性粒细胞在致敏中的作用与其在过敏反应或肺部炎症中的效应功能分离开来，为预防过敏共病症的发展提供了新的策略思路。

图形摘要

在特应性皮炎模型中，嗜碱性粒细胞促进炎症、屏障破坏和对皮肤接触的OVA的IgE产生。嗜碱性粒细胞通过皮肤驱动过敏性致敏，使肺部在受到相同过敏原的气道攻击时易于发生炎症。致敏期间耗竭嗜碱性粒细胞可减少肺部嗜酸性粒细胞增多和CCL17/CCL24水平，而要在攻击期间也损害^Il4/^Il13表达，则需要攻击期间额外的嗜碱性粒细胞缺失。

缩写

CCL：C-C motif趋化因子配体

IgE：免疫球蛋白E

MC903：卡泊三醇

Mcpt8：肥大细胞蛋白酶8

OVA：卵清蛋白

WT：野生型

1 引言

过敏性疾病如特应性皮炎（AD）和哮喘在全球范围内造成重大健康负担，影响数百万人，凸显了深入了解其潜在机制的迫切性。虽然AD和哮喘之间的流行病学联系已明确确立，并可在小鼠模型中复制，但驱动这种关联的具体机制仍知之甚少。特别是，免疫细胞在将过敏反应从皮肤传播到肺部的作用仍然难以捉摸。在涉及过敏反应的各种细胞和病理机制中，嗜碱性粒细胞已成为关键参与者，其在AD皮肤中增加。嗜碱性粒细胞以其产生关键量IL-4的能力而闻名，IL-4是与过敏相关的2型免疫反应的核心。它们还在不同模型中促进皮肤屏障完整性的丧失，认为与增强过敏原摄取有关。最近一项小鼠研究表明，嗜碱性粒细胞在通过机械破坏的皮肤进行系统性过敏原致敏中起重要作用，但在AD背景下是否成立以及这是否足以诱导或影响特应性共病症仍不清楚。为了解决这一空白，我们的研究采用已建立AD模型的修改版本，其中我们额外将过敏原应用于皮肤。作为特应性疾病，AD和过敏性哮喘由与适应性免疫相关的升高的系统性IgE水平定义。缺乏适应性免疫（包括IgE）阻止了具有遗传性皮肤屏障缺陷的小鼠发生继发性自发性肺部炎症。因此，我们分析了嗜碱性粒细胞对IgE形成和分布的影响，作为共病症的可能驱动因素。本研究重点阐明嗜碱性粒细胞如何通过皮肤致敏驱动肺部炎症，为从AD到哮喘的进展提供新的见解。

2 结果

2.1 嗜碱性粒细胞驱动局部皮肤炎症并促进皮肤应用过敏原的特异性B细胞形成

为了研究嗜碱性粒细胞在通过皮肤过敏原致敏中的作用，我们应用了一个类似于最近发表方案的AD模型。在该模型中，反复局部应用维生素D3类似物MC903（卡泊三醇）到耳朵诱导AD驱动警报素TSLP，在AD患者中也发现TSLP升高。TSLP在MC903驱动的模型中高度相关，因为TSLP缺陷小鼠仅出现轻微疾病症状。除了MC903，我们应用卵清蛋白（OVA）作为可追踪的模型过敏原，以评估针对原本无害物质的皮肤致敏效力。与用于在皮肤炎症背景下分析肺部致敏的另一个模型不同，我们仅将过敏原应用于发炎的皮肤进行致敏。此外，我们的模型不像基于胶带剥离的模型那样急性机械破坏屏障，这可能促进过敏原快速摄取，而不允许我们旨在分析的AD样环境的发展。MC903诱导的TSLP作用于几种细胞类型以促进AD症状，包括激活促进CD4⁺ T细胞Th2极化的树突状细胞、诱导嗜碱性粒细胞发育和ILC2激活。作为AD设置的基本病理读数，我们进行了组织学检查，测量了经皮水分流失（TEWL；屏障完整性指标），确定了耳朵肿胀（炎症），并对皮肤浸润效应细胞进行了流式细胞术分析。为了分析嗜碱性粒细胞的作用，我们利用了嗜碱性粒细胞缺陷（Mcpt8Cre）小鼠，这些小鼠也携带荧光IL-4报告基因（4get）。在AD模型中，Mcpt8Cre小鼠在H&E染色的耳部切片中显示略微减轻的病理，虽然嗜碱性粒细胞预期在血液和发炎皮肤中缺失，但与野生型（WT）相比，耳朵中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的浸润仅呈现减少趋势。与之前的发现一致，我们观察到Mcpt8Cre小鼠耳朵肿胀和屏障损伤减少，表明通过更完整屏障的皮肤应用过敏原交叉减少。接下来，我们通过流式细胞术确定了耳部引流淋巴结（耳LN）中针对皮肤应用OVA的B细胞和抗体产生浆细胞（PCs）的局部形成。高亲和力抗体的产生，包括驱动过敏的IgE，依赖于次级淋巴器官（如LN）中B细胞在生发中心（GC）的亲和力成熟，我们对此进行了分析。正如预期，我们在Mcpt8Cre小鼠的LN中几乎检测不到嗜碱性粒细胞，而MC903 + OVA处理的Mcpt8Cre小鼠和WT同窝小鼠的PCs、CD4⁺ T细胞、Th2细胞或总IgG1⁺和IgE⁺ GC B细胞数量相似。相反，我们观察到MC903 + OVA处理的Mcpt8Cre小鼠中OVA特异性IgG1⁺和IgE⁺ B细胞和PCs数量显著减少。因此，LN中的一般2型免疫反应似乎没有剧烈改变。因此，嗜碱性粒细胞缺陷小鼠中对皮肤应用过敏原的反应特异性减少更意味着嗜碱性粒细胞促进屏障损伤和炎症，从而增强通过皮肤的过敏原摄取以驱动OVA特异性免疫。值得注意的是，我们在纵隔、肺部引流LN中未检测到抗体特异性GC B细胞或PCs，表明在分析的时间点，OVA特异性抗体形成仅限于局部皮肤引流LN。AD样症状和通过皮肤的致敏的一般发展是MC903依赖性的，因为单独使用MC903溶剂乙醇（EtOH）或与OVA联合处理不会诱导AD样症状或致敏。MC903依赖性致敏可能通过诱导2型免疫发生，这导致角质形成细胞中表皮分化复合物的下调，从而使皮肤屏障对过敏原更易渗透。总之，这些发现强调嗜碱性粒细胞是局部炎症和屏障损伤的强大介质，促进皮肤应用过敏原的B细胞和PC形成。

2.2 嗜碱性粒细胞促进IgE依赖性过敏反应的系统性致敏

接下来，我们分析了局部形成的抗体反应在MC903模型过程中如何系统性分布。在血清中，我们发现OVA特异性抗体，IgE在第12天首次检测到并达到峰值，IgG1从第12天开始上升，Mcpt8Cre小鼠的水平低于WT。相反，总IgE浓度上升，IgG1保持不变直到第14天，各处理组测量的浓度相似。为了了解嗜碱性粒细胞如何调节对皮肤遭遇过敏原的体液免疫的系统性形成，我们进行了被动过敏反应实验，将致敏WT或Mcpt8Cre小鼠的血清转移到C57BL/6小鼠中，随后用50μg OVA静脉攻击。在这个系统中，嗜碱性粒细胞作为过敏反应的效应细胞存在于受体小鼠中，观察到的变化仅取决于随血清转移的体液免疫的数量和质量。为了测试诱导的过敏反应是否依赖IgE，我们还添加了一个组，向其转移来自致敏IgE缺陷（IgEKO）小鼠的血清。读数是过敏反应期间观察到的体温下降。来自致敏Mcpt8Cre小鼠的血清转移导致体温下降明显比来自致敏WT同窝小鼠的血清温和，而仅来自MC903处理WT或OVA致敏IgEKO小鼠的血清转移在攻击后不会引起体温变化。这表明嗜碱性粒细胞促进的体液致敏与加速IgE介导的过敏反应相关。

2.3 皮肤致敏中的嗜碱性粒细胞 predispose 肺部对气道攻击反应升高

发现嗜碱性粒细胞促进对皮肤遭遇过敏原的血清抗体反应后，我们接下来分析肺部细胞是否也通过皮肤应用过敏原而致敏。为了分析皮肤介导的致敏，我们确定了皮肤致敏后肺部嗜碱性粒细胞负载OVA特异性IgE的情况。由于Mcpt8Cre小鼠缺乏嗜碱性粒细胞，我们仅在WT小鼠中确定了嗜碱性粒细胞致敏。在那里，我们发现OVA处理小鼠的嗜碱性粒细胞负载了OVA特异性抗体。作为参考，我们还确定了脾脏中嗜碱性粒细胞的负载。为了评估结合的OVA特异性抗体的功能相关性，我们用OVA离体刺激来自WT和WT + OVA组（第14天）的含嗜碱性粒子的单细胞悬浮液。我们测量到WT + OVA组肺和脾脏嗜碱性粒细胞上CD63表达增强，这是激活/脱颗粒的读数，但WT组没有。与脾脏相比，WT + OVA组肺部嗜碱性粒细胞表面激活/脱颗粒标志物CD63的上调增强。我们进一步评估了标记OVA结合到嗜碱性粒细胞表面的平均荧光强度（MFI），观察到WT + OVA组肺部嗜碱性粒细胞与脾脏嗜碱性粒细胞相比表现出更高的结合OVA MFI。虽然两个器官的细胞都致敏，但它表明致敏肺部嗜碱性粒细胞比脾脏嗜碱性粒细胞具有更高的炎症潜力。这突出了肺部嗜碱性粒细胞的有效致敏。我们还在皮肤致敏小鼠的脾脏和肺部发现OVA特异性B细胞。为了增强OVA特异性B细胞检测，我们排除了非目标事件，包括嗜碱性粒细胞（CD49b⁺）、浆细胞（TACI⁺）和嗜酸性粒细胞（Siglec-F⁺），同时通过选择这些通道的阴性事件来解决潜在的自发荧光。虽然Mcpt8Cre和WT小鼠肺和脾脏中总IgG1⁺和IgE⁺ B细胞数量以及OVA特异性IgG1⁺ B细胞数量相似，但致敏Mcpt8Cre小鼠中OVA特异性IgE⁺ B细胞减少。我们通过分析致敏IgEKO小鼠确认了OVA特异性IgE⁺ B细胞染色的特异性，这些小鼠预期缺乏OVA特异性IgE⁺ B细胞。为了发现观察到的对皮肤遭遇OVA的致敏是否足以加速过敏性肺部炎症，我们在WT + OVA模型第12天用200μg OVA鼻内攻击WT和Mcpt8Cre小鼠，连续三天。作为对照，我们包括未处理WT组和MC903处理但未局部应用OVA的WT小鼠。肺组织切片的组织学分析表明，与Mcpt8Cre小鼠相比，致敏WT小鼠炎症更强。然后，我们确定了总肺组织和支气管肺泡（BAL）液中的嗜酸性粒细胞数量，这是过敏性肺部炎症的常见读数。我们观察到仅MC903模型诱导的炎症性Siglec-F^high嗜酸性粒细胞有增多趋势。在OVA致敏组中，与WT对照组相比，Mcpt8Cre小鼠招募的炎症性Siglec-F^high嗜酸性粒细胞显著减少。相反，我们未观察到Siglec-F^low嗜酸性粒细胞群体的变化。在转录水平上，我们发现Mcpt8Cre小鼠中^Il4水平降低，表明2型免疫反应减弱，并且编码嗜酸性粒细胞趋化因子-2并驱动嗜酸性粒细胞募集的^Ccl24上调减弱。编码嗜酸性粒细胞趋化因子-1的基因^Ccl11和招募Th2细胞的^Ccl17没有改变。在肺部炎症和哮喘特征中上调的^Fn1（组织修复、纤维化）、^Arg1（免疫调节、组织修复）和^Pdcd1lg2（免疫调节/耐受）在肺攻击时，Mcpt8Cre小鼠与WT相比显示基因水平表达显著降低，表明嗜碱性粒细胞缺陷小鼠炎症减轻。在攻击情况下，我们进一步发现Mcpt8Cre小鼠与WT相比^Mmp13水平更高，该基因编码一种抗纤维化金属蛋白酶，可能表明缺乏嗜碱性粒细胞时肺损伤减少。标志物^Col1a1、^Muc5ac、^Retnla和^Retnlb未改变，表明嗜碱性粒细胞在我们的模型中选择性调节基因表达。这些结果表明，嗜碱性粒细胞对皮肤遭遇过敏原致敏的影响可能与驱动过敏性肺部炎症相关。

2.4 嗜碱性粒细胞促进皮肤介导的致敏本身加剧过敏性肺部炎症，独立于嗜碱性粒细胞在肺部炎症中的效应功能

虽然我们使用Mcpt8Cre小鼠的实验提供了嗜碱性粒细胞增强对皮肤遭遇过敏原致敏的证据，但观察到的后续过敏性肺部炎症的差异仍可能由肺攻击期间缺失嗜碱性粒细胞效应功能引起。为了将嗜碱性粒细胞在皮肤介导致敏中的作用与其在肺过敏原攻击中的作用分离开来，我们在开始AD+OVA模型前2天向WT小鼠静脉注射50μg抗CD200R3抗体，以在致敏期选择性耗竭嗜碱性粒细胞。对照小鼠注射50μg同型对照抗体。在耗竭组中，我们观察到在OVA致敏开始时血液中嗜碱性粒细胞（CD49b⁺IgE⁺）减少约80%。值得注意的是，小鼠肥大细胞是CD49b^?，因此被排除在嗜碱性粒细胞门外。嗜碱性粒细胞数量随时间恢复，当我们在第12天开始肺攻击时，嗜碱性粒细胞耗竭组和对照组在血液和肺中的嗜碱性粒细胞数量没有显著差异。因此，嗜碱性粒细胞在模型肺攻击期可作为效应细胞使用。然而，我们也观察到在致敏期嗜碱性粒细胞耗竭的小鼠肺部炎症性Siglec-F^high嗜酸性粒细胞招募减少，而Siglec-F^low嗜酸性粒细胞群体没有改变。与Mcpt8Cre小鼠的肺攻击实验相反，当嗜碱性粒细胞仅在致敏期缺失时，攻击肺中^Il4和^Il13表达水平与未耗竭对照组相似，表明效应期有功能的2型免疫反应。然而，^Ccl24仍然降低，因此似乎依赖于致敏期的嗜碱性粒细胞。在Mcpt8Cre小鼠肺攻击实验中仅显示减少趋势的^Ccl17，在暂时性嗜碱性粒细胞耗竭小鼠中与对照组相比甚至显著降低。^Fn1、^Arg1、^Mmp13、^Retnla和^Retnlb基因的表达在暂时性嗜碱性粒细胞耗竭小鼠与对照组相似。因此，在嗜碱性粒细胞缺陷Mcpt8Cre小鼠肺攻击中观察到的大多数差异和趋势可能由肺攻击期嗜碱性粒细胞效应功能解释。^Ccl24和^Ccl17的减少和显著差异在蛋白质水平上得到进一步证实。这些数据有助于理清嗜碱性粒细胞在皮肤介导致敏中的作用与肺中效应功能的关系。总之，嗜碱性粒细胞驱动的通过皮肤致敏使肺部易于对气道攻击产生升高反应。

3 方法

3.1 小鼠

使用嗜碱性粒细胞缺陷Mcpt8Cre小鼠、Mcpt8Cre阴性（WT）同窝小鼠（两者均携带IL-4 IRES-eGFP报告基因）、IgE缺陷（IgEKO）小鼠和C57BL/6小鼠。所有小鼠均为C57BL/6背景，8-12周龄。动物实验经Regierung von Unterfranken批准，并根据德国动物保护法进行。

3.2 通过皮肤致敏和体内肺攻击

对于AD模型，小鼠双耳通过局部应用2 nmol MC903（溶于20μL EtOH）进行处理，每侧耳朵应用10μL。处理每两天重复一次，直到第14天分析，除非另有说明。在OVA致敏情况下，当MC903处理后EtOH蒸发后，每只小鼠添加100μg卵清蛋白（OVA）（溶于40μL PBS）。对于肺攻击实验，小鼠通过皮肤致敏直到第12天。然后，致敏小鼠从第12天开始连续三天用200μg OVA鼻内攻击，并在第15天分析。

3.3 耳朵厚度和经皮水分流失（TEWL）测量

使用电子卡尺测量耳朵上侧厚度。使用Tewameter TM Nano设备评估经皮水分流失（TEWL）。TEWL测量至少90秒直到数值稳定。

3.4 嗜碱性粒细胞耗竭

C57BL/6小鼠中的嗜碱性粒细胞在致敏前2天通过静脉注射50μg抗CD200R3抗体（克隆Ba160）进行耗竭。对照小鼠接受50μg同型对照抗体（克隆RTK4530）。

3.5 被动过敏反应

C57BL/6小鼠通过静脉注射200μL来自耳朵致敏WT或Mcpt8Cre小鼠的血清进行被动致敏。24小时后，用200μg OVA静脉攻击小鼠。在攻击后指定时间点直肠测量体温。

3.6 流式细胞术和组织制备

通过研磨通过细胞筛制备耳LN、纵隔LN、脾脏和肺（用PBS灌注）的单细胞悬浮液。将肺切成小块，并用DNase DN25和Liberase（100μg/mL）在37°C消化30分钟。使用ACK缓冲液用于脾脏和肺样品中的红细胞裂解。在表面染色前，使用乙酸缓冲液处理细胞以去除亲细胞性IgE。使用Fc-Block（克隆2.4G2）后在4°C用抗体染色30分钟。细胞进一步使用Cytofix/Cytoperm固定和透化，然后使用Phosflow Perm/Wash Buffer进行IgE细胞内染色。使用BD LSRFortessa流式细胞仪和FlowJo软件分析细胞。为了确定总细胞数，我们计数了来自不同器官的单细胞悬浮液中的活细胞（台盼蓝阴性）。为了计算每个细胞群体的总数，我们通过流式细胞术确定了每个群体在活细胞（可固定活力染料阴性）中的百分比，并将其乘以计数的活细胞数。

3.7 ELISA和LEGENDplex测定

使用标准ELISA方法测定OVA特异性或总IgE和IgG1血清水平。简而言之，使用抗IgE（克隆R35-72）、抗IgG1（H + L）或OVA进行包被，并使用3%牛血清白蛋白进行封闭。然后加入血清样品或标准品（IgE κ同型或IgG1-未标记）。使用与碱性磷酸酶偶联的抗小鼠IgE或抗小鼠IgG1作为检测抗体。

对于基于珠子的趋化因子测量，将右肺中叶用OMNI Bead Ruptor在RIPA裂解缓冲液中匀浆，并使用LEGENDplex Kits分析所得上清液。

3.8 RNA提取和qRT-PCR测定

右肺中叶在TRIzol Reagent中匀浆和裂解以进行RNA分离。使用SYBR Green在ViiA 7实时PCR系统上使用TaqMan Array Block进行定量RT-PCR。引物列在补充材料中。

3.9 组织学

从耳朵（7μm厚）生成冷冻切片，从肺部（3μm厚）生成石蜡切片。切片用苏木精和伊红染色，并用Axio Vert. A1显微镜成像，使用ZEN软件处理。

3.10 统计分析

使用GraphPad Prism 5进行统计分析。Student's t检验用于两组之间的比较，而单因素ANOVA followed by Bonferroni校正用于评估多组之间的比较。或者，当每个处理组与对照组进行特定比较时，应用单因素ANOVA with Dunnett's检验。当实验数据包括协变量（如时间）时，使用双因素ANOVA with repeated measures and Bonferroni校正。数据表示为平均值+ SEM。

4 讨论

粒细胞在过敏中是重要的效应细胞，特别是嗜碱性粒细胞在过敏反应不同阶段的情境依赖性作用在过去几年有所改进。本研究证明嗜碱性粒细胞驱动对皮肤应用过敏原的肺部致敏。该机制可能在进化上相关，用于防御通过皮肤遭遇但也可能被吸入并到达肺部的空气传播病原体。我们和其他人观察到嗜碱性粒细胞在MC903模型中促进屏障损伤，这可能促进过敏原的屏障交叉。然而，即使在屏障通过胶带剥离机械受损的模型中，可能增强独立于嗜碱性粒子的过敏原渗透，当嗜碱性粒细胞缺失时，树突状细胞的过敏原呈递和系统性致敏也会减少。这通过测量针对皮肤应用过敏原的血清抗体浓度和脾细胞的离体再刺激来确定，表明嗜碱性粒细胞对过敏性致敏的贡献超出了其在屏障破坏中的作用。例如，嗜碱性粒细胞在2型免疫反应期间归巢到次级淋巴器官，并可能有助于GC的2型偏倚和随后的体液反应。这些方面不仅与过敏相关，而且与针对皮肤遭遇寄生虫的疫苗开发相关，因为嗜碱性粒细胞有助于小鼠对继发性巴西日圆线虫感染的保护。在我们分析的时间点，对皮肤应用过敏原的适应性免疫主要在皮肤引流LN中局部形成。这与屏障交叉后系统性传播的过敏原不同，如皮肤穿透线虫所见。因此，局部治疗皮肤可能有益于降低发生远处共病症的风险。然而，OVA特异性IgE在我们的模型中分布，并且过敏原特异性IgE与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上Fc受体的结合可以在过敏原结合时诱导抗体介导的系统性过敏反应。虽然人类中这种AD依赖性机制得到经验数据支持，但机制理解缺乏。Mcpt8Cre小鼠血清中对皮肤遭遇过敏原的过敏原特异性抗体减少表明嗜碱性粒细胞在作为过敏反应先决条件的系统性致敏中相关。此外，血清中过敏原特异性抗体浓度可能是远端器官致敏和AD相关共病症如哮喘发展的指标。有趣的是，与OVA致敏小鼠脾脏相比，肺部嗜碱性粒细胞攻击后脱颗粒标志物表达更高，表明OVA特异性抗体可用性或器官特异性激活阈值存在差异。除了在致敏中的作用外，嗜碱性粒细胞是IgE介导过敏反应和过敏性肺部炎症中的效应细胞，突出了它们在不同过敏情境中的相关性。值得注意的是，肺屋尘螨模型中嗜碱性粒细胞效应功能独立于IgE，表明在我们抗体介导的嗜碱性粒细胞耗竭设置中，再增殖嗜碱性粒子的IgE负载潜在差异可能不影响肺攻击时的嗜碱性粒细胞功能。然而，相关的嗜碱性粒细胞对肺部炎症的贡献似乎是情境依赖性的，并且在其他设置中嗜碱性粒细胞是可有可无的。嗜碱性粒细胞还能够介导其他2型效应细胞的招募，并可能在荨麻疹模型中通过促进^Ccl24表达诱导嗜酸性粒细胞招募。由于我们也发现嗜碱性粒细胞促进CCL24，这可能是皮肤致敏小鼠肺攻击中嗜碱性粒细胞介导的嗜酸性粒细胞招募的相关因素。本研究独特地将嗜碱性粒细胞在皮肤介导致敏中的作用与其下游效应功能分离开来，以了解嗜碱性粒细胞如何促进过敏多病症的易感性。虽然重点关注过敏反应和肺部炎症作为哮喘发展的模型，但研究结果也可能对其他过敏共病症（如食物过敏）产生影响，食物过敏在人类中与皮肤炎症相关。然而，与任何小鼠模型一样，我们使用的MC903和OVA致敏模型只能部分重现AD患者的情况。它不反映人类群体中不同的疾病内型或异质性。此外，小鼠和人类皮肤的结构和组成不同。然而，该模型可能有助于揭示小鼠和人类之间保守的机制，以设想预防疾病的策略。此外，结合其他小鼠模型，如具有受损皮肤屏障并显示对皮肤应用过敏原致敏的丝聚蛋白突变小鼠，可能会发现共享和独特的病理机制，有助于理解人类疾病内型。基于我们的发现，限制皮肤中嗜碱性粒细胞活性的药物，如磷酸二酯酶4抑制剂Difamilast，可能具有干扰皮肤介导致敏的潜力。未来的研究应探索用于治疗AD的新药和现有药物在预防嗜碱性粒细胞驱动共病症方面的潜力。

作者贡献

D.R.和D.V.概念化研究。E.D.C.、D.R.和D.V.设计实验；E.D.C.和D.R.进行实验并分析数据。E.D.C.、D.R.和D.V.审查数据，贡献于解释，并编辑手稿。D.R.和D.V.为本研究获取资金。所有作者批准最终提交的手稿版本。

致谢

我们感谢Wolfgang Pfützner、Thilo Jakob和Anja Lux的有益讨论。我们进一步感谢Kirstin Castiglione和Daniela D?hler的技术支持，以及Lars Nitschke和Thomas Winkler提供试剂。财政支持由德国研究基金会（DFG）项目RA 3732/1-1和RA 3732/1-3（致D.R.）、VO 944/9-2和VO 944/13-1（致D.V.）以及埃尔朗根-纽伦堡弗里德里希-亚历山大大学医学院的跨学科临床研究中心（IZKF）（项目P141致D.R.）授予。开放获取资金由Projekt DEAL启用和组织。

利益冲突

作者声明无利益冲突。