综述：纳米毒素通过原位焦亡使αPD1敏化以消融微卫星稳定结直肠癌转移灶

本综述创新性提出一种靶向CXCR4+肿瘤的纳米毒素TDX，通过诱导原位焦亡（pyroptosis）激活免疫微环境，使传统免疫耐药MSS型CRC对PD-1抑制剂重敏。研究证实TDX与αPD1联用可协同促进CD8+T细胞浸润与穿孔素分泌，显著消除肝肺转移灶而不引发系统毒性，为免疫冷肿瘤转化提供了新策略。

　　

纳米毒素诱导原位焦亡的作用机制

T22-DITOX-H6（TDX）是一种模块化纳米颗粒，由N端的T22肽（靶向CXCR4受体）、白喉毒素催化结构域和转位结构域以及C端的6-His标签组成。其通过多价配体展示实现选择性内化至CXCR4过表达的肿瘤细胞，经弗林蛋白酶切割释放毒素亚单位，抑制真核延伸因子2（eEF2）引发核糖体应激，进而激活NLRP3炎症小体-Caspase-1-GSDMD焦亡通路，并促进IL-1β分泌。

免疫微环境的重编程

在免疫健全的MSS型CT26结直肠癌模型中，TDX单药治疗可诱导肿瘤组织出现DNA凝缩、cleaved Caspase-1(p20)上调等焦亡特征，同时伴随IFNγ分泌增加和CD8⁺T细胞密度显著升高（较对照组增加4倍）。这种由焦亡驱动的免疫原性细胞死亡（ICD）成功将"免疫冷"肿瘤转化为"免疫热"表型。

协同免疫检查点抑制剂的抗转移效应

TDX与αPD1序贯联合治疗展现出显著的协同效应：在肝转移灶中，86%的小鼠实现转移灶完全消除，并伴随CD8⁺T细胞浸润和穿孔素分泌大幅增加；在肺转移模型中，71%的小鼠达到无转移状态。值得注意的是，不同器官转移灶对治疗的反应存在异质性：在肠系膜和腹膜转移中虽见病灶缩小，但穿孔素表达未见显著升高，提示可能存在颗粒酶等替代性细胞毒性机制。

安全性评价

重复给药实验显示，TDX单药及联合治疗均未引发系统性毒性。小鼠体重保持稳定，肝肾功能指标（AST/ALT/肌酐/尿酸）与血细胞谱系（红细胞/白细胞/血小板）均在正常范围内，证实了纳米毒素的靶向特异性。

临床转化潜力

该研究为85%对ICIs原发耐药的MSS型mCRC患者提供了新型治疗范式。通过模拟白喉感染的自然免疫应答过程，利用细菌毒素诱导原位焦亡，突破肿瘤免疫耐受屏障，为实现转移灶特异性免疫治疗奠定了理论基础。

技术特色与创新性

研究采用新型正交移植瘤模型（CT26.LMet2），通过脾内接种三轮筛选获得高转移性细胞系，更好模拟人类转移性CRC特征。Western blot分析证实TDX处理可诱导GSDMD切割和Caspase-1激活，动态光散射显示纳米颗粒直径约100nm，确保其具有理想的肿瘤靶向性能。