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这篇综述聚焦犬乳头瘤病毒（CPV），详细阐述了其诊断方法和疫苗研发进展。文中介绍了多种诊断技术，如组织病理学（H&E 染色）、分子技术（PCR 等）；还探讨了各类疫苗，如灭活、DNA 和重组蛋白疫苗。对研究 CPV 具有重要参考价值。
犬乳头瘤病毒：诊断方法现状与疫苗创新
乳头瘤病毒（PVs）是一类环状双链 DNA 病毒，可感染脊椎动物的上皮细胞，引发皮肤和黏膜的良性或恶性肿瘤。犬乳头瘤病毒（Canine Papillomavirus，CPV）主要通过接触感染的皮肤或黏膜传播给犬类，根据风险类型可引发良性疣或鳞状细胞癌等疾病，其感染症状受宿主免疫状态影响，免疫功能低下的犬（如患病或老年犬）发生恶性转化的风险更高1。
CPV 在全球范围内广泛存在，但不同地区的感染率有所差异。例如，瑞士一项研究在超过 50% 的健康犬口腔和指尖皮肤细胞样本中检测到 CPV DNA；美国的研究在犬组织样本（包括鼻拭子）中的检测率为 5.3% 。巴西、瑞士和南非的研究还揭示了不同种群中多样的 CPV 基因型和感染率2。
早期准确诊断 CPV 感染对控制疾病发展和预防传播至关重要，目前已有多种针对 CPV 的诊断方法，这些方法基于 CPV 的结构和基因特征展开，CPV 基因组约 8kb，为小型环状双链 DNA，包含八个开放阅读框（ORFs），编码早期蛋白（E1、E2、E4、E5、E6、E7）和晚期蛋白（L1、L2），以及调控复制和转录的非编码长控制区（LCR） 。CPV 病毒粒子呈无包膜的二十面体结构，直径约 50 - 60nm3。
- 组织病理学检查（H&E 染色）：H&E 染色是诊断 CPV 相关病变的基础方法，可观察到上皮增生、角化过度、颗粒层角质形成细胞变化以及挖空细胞等特征，但该方法特异性较低，无法区分 CPV 类型，也不能单独确认病毒 DNA 或蛋白质的存在，常需与其他技术联合使用4。
- 聚合酶链反应（PCR）：PCR 是检测 CPV DNA 的常用技术，具有高灵敏度和特异性。通过针对病毒基因组保守区域（如 L1 和 E1 基因）设计引物，可扩增并检测临床样本中的 CPV DNA。为检测多种 CPV 基因型，已开发出通用或简并引物，但目前这些引物仍未覆盖所有已鉴定的 26 种 CPV 基因型5。
- 滚环扩增（RCA）：RCA 适用于扩增环状 DNA 基因组，可用于检测 CPV。它能从极少量样本中生成大量 DNA，有助于发现新的 CPV 基因型，但存在非特异性扩增其他环状 DNA 的风险6。
- DNA 原位杂交（DNA ISH）：DNA ISH 可直接在组织切片中可视化 CPV 基因组，通过标记探针与病毒 DNA 序列互补杂交，确定病毒在细胞内的位置。该方法在确认 CPV 存在方面有一定效果，但敏感性相对较低，常与 PCR 或免疫组化（IHC）联合使用7。
- 下一代测序（NGS）和宏基因组学：NGS 和宏基因组学可对病毒基因组进行高通量测序，能全面检测已知和新型 CPV，在复杂样本中识别多样的病毒种群，但成本高、数据分析复杂，需要先进的计算基础设施8。
- 免疫组化（IHC）：IHC 用于检测组织样本中的病毒抗原（如 L1 蛋白），通过特定抗体识别病毒抗原，可定位病毒在组织中的分布。不过，该方法存在抗体交叉反应和敏感性较低的问题，常与分子技术结合使用9。
- 酶联免疫吸附测定（ELISA）：ELISA 用于检测犬血清中的 CPV 特异性 IgG 抗体，可评估体液免疫反应，在疫苗效果评估等方面应用广泛，但结果受抗原和抗体质量影响10。
- 透射电子显微镜（TEM）：TEM 可直观观察到 CPV 病毒粒子的形态和在细胞内的位置，为感染提供形态学证据，还可用于验证重组病毒样颗粒（VLP）在疫苗开发中的结构完整性，但该技术成本高、技术要求高，主要用于研究11。
当前的诊断方法各有优缺点，分子技术（如 PCR 和 NGS）虽灵敏度和特异性高，但设备和技术要求也高；组织学技术（如 DNA ISH 和 IHC）可实现病毒定位，但操作繁琐；TEM 提供直接形态学证据，但应用受限。未来 CPV 诊断技术的发展方向是将分子技术与便携、易用的技术相结合，开发更经济、便捷的诊断工具1213。
疫苗接种是预防 CPV 感染的有效策略，目前针对 CPV 的疫苗研发取得了一定进展，同时也面临诸多挑战。
- 灭活疫苗和减毒活疫苗：灭活疫苗通过化学或物理方法使病毒失去活性，保留免疫原性，安全性高，但通常需要佐剂增强免疫原性，并多次接种以维持长期保护。减毒活疫苗使用弱毒病毒，可诱导强烈持久的免疫反应，但存在毒力返强和引发疾病的风险，如在部分接种未减毒 COPV 疫苗的犬中观察到注射部位出现鳞状细胞癌1415。
- DNA 疫苗：DNA 疫苗通过质粒编码关键病毒蛋白（如 L1、E1 或 E2），在宿主细胞内表达以刺激体液免疫和细胞免疫。它具有安全性高、稳定性好、生产成本低等优点，但免疫原性相对较弱，目前正通过开发先进的佐剂和递送技术（如电穿孔和纳米颗粒载体）来增强免疫反应16。
- 重组蛋白疫苗：重组蛋白疫苗利用病毒衣壳蛋白（如 L1 和 L2）或调节蛋白（如 E1 和 E2）的免疫原性来预防和控制 CPV 感染。L1 蛋白可自组装成病毒样颗粒（VLPs），模拟天然病毒结构，诱导特异性免疫反应；L2 蛋白提供保守表位，有望开发出具有交叉保护作用的疫苗。重组蛋白疫苗可通过多种表达系统生产，如细菌、昆虫细胞、腺病毒载体和植物表达系统，但存在生产成本高和生产工艺复杂的问题17。
不同类型的 CPV 疫苗各有优劣，传统的灭活和减毒活疫苗为 CPV 免疫提供了基础，但存在安全性和免疫原性方面的问题；创新的 DNA 和重组蛋白疫苗具有独特优势，但也面临生产和免疫原性优化等挑战1819。
VLP 疫苗在预防 CPV 方面表现出强大潜力，能有效诱导中和抗体和细胞免疫反应。此外，新兴的 RNA 疫苗（如 mRNA 平台）在人类病毒感染防治中取得成功，为 CPV 免疫提供了新思路。多价 VLPs 和嵌合构建体等创新技术有望拓宽疫苗的保护范围。然而，目前仍没有商业化的 CPV 疫苗，主要挑战包括对犬 CPV 感染的研究关注度不足、实现交叉保护免疫困难、疫苗的可及性和可负担性问题等。未来需优化疫苗生产方法、整合即时诊断工具与疫苗接种计划，以推动 CPV 预防工作的发展202122。
CPV 诊断和疫苗开发的进展为应对这一犬类常见疾病带来了希望。诊断方法的不断完善有助于更准确地检测和了解 CPV 感染，但仍需解决成本高、可及性差和技术要求高的问题；疫苗研发在传统和创新技术的推动下取得了进步，但要实现广泛有效的疫苗保护，还需克服安全性、免疫原性和生产等方面的挑战。未来应将诊断工具与疫苗策略相结合，持续优化疫苗生产和免疫技术，以保障犬类健康232425。
