靶向抑制Ninjurin2通过抑制肿瘤起始细胞增强化疗耐药性胃癌的化疗敏感性

本研究针对胃癌治疗中ECF（表柔比星、顺铂和5-氟尿嘧啶）方案耐药性问题，通过建立ECF耐药（ECF-R）胃癌细胞系和类器官模型，发现神经损伤诱导蛋白2（NINJ2）在耐药细胞中高表达且与CD44+ 肿瘤起始细胞（CICs）富集相关。研究证实NINJ2通过结合periostin激活VAV2磷酸化通路介导耐药性，其抑制可显著增强ECF敏感性并延缓复发。临床分析显示NINJ2高表达与患者不良预后相关，为胃癌耐药提供了新型生物标志物和治疗靶点。

　　

胃癌是全球第五大常见癌症和第三大癌症相关死亡原因，尽管ECF联合化疗方案的应用改善了患者生存率，但化疗耐药导致的复发仍是临床重大挑战。耐药性可分为固有性和获得性两类，其中肿瘤起始细胞（CICs）的休眠特性使其能逃逸常规化疗。现有靶向治疗如CD44或Notch抑制剂因在正常组织中广泛表达而伴随副作用，亟需发现特异性靶点。

为解决这一问题，延世大学医学院的研究团队通过逐步递增ECF剂量处理，建立了耐药性胃癌细胞系（ECF-R），并利用转录组分析发现NINJ2在耐药细胞中特异性高表达。该蛋白在正常组织中表达极低，但在ECF-R细胞中与CD44⁺
CICs共定位，且过表达可诱导细胞周期停滞于G₀
/G₁
期。研究进一步通过液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）和表面等离子共振（SPR）技术证实NINJ2与periostin直接结合，激活VAV2磷酸化信号，从而维持耐药性。动物实验显示NINJ2敲除使肿瘤对ECF敏感性提升3倍，患者数据验证其高表达与疾病进展和生存率降低显著相关。该成果发表于《Biomarker Research》，为克服胃癌耐药提供了新策略。

关键实验方法

1. 建立ECF-R细胞模型：通过IC₅₀
   /IC₈₀
   剂量梯度诱导MKN-74（肠型）和SNU-484（弥漫型）胃癌细胞耐药；
2. 转录组测序：筛选耐药相关膜蛋白基因，结合Gene Ontology分析锁定NINJ2；
3. 磷酸化蛋白抗体阵列：检测NINJ2过表达细胞中1,318种磷酸化蛋白变化；
4. 类器官模型：患者来源肿瘤类器官验证NINJ2在耐药中的作用；
5. 体内实验：裸鼠移植瘤模型评估NINJ2 siRNA联合ECF的疗效。

研究结果
NINJ2在ECF-R胃癌细胞中显著上调
RNA测序显示NINJ2在耐药细胞中表达升高15倍（图1C），且isoform-3亚型在正常组织中几乎不表达（图1D）。蛋白水平验证显示MKN-74和SNU-484耐药细胞中NINJ2表达分别增加12倍和9倍（图1F）。

NINJ2依赖的CD44⁺
CICs富集
流式分析揭示ECF-R细胞中NINJ2⁺
CD44^hi
群体占比达9.6%，而亲本细胞仅0.8%（图2A-C）。TCGA数据证实NINJ2与CD44 mRNA水平正相关（r=0.62，图2D），过表达实验显示NINJ2可使CD44⁺
细胞比例从1.4%增至13.4%（图2G）。

NINJ2通过细胞周期停滞促进耐药
NINJ2敲除降低p27^KIP1
表达并增加CDK2/4/6磷酸化（图3D），逆转G₀
/G₁
期阻滞（图3C）。侵袭实验表明NINJ2通过上调vimentin增强转移潜能（附图S3F-G）。

NINJ2-periostin-VAV2信号轴机制
LC-MS/MS和免疫共沉淀鉴定periostin为NINJ2结合伴侣（图4A），SPR测得结合常数K_D
=1.69×10^-8
M（图4B）。磷酸化阵列显示VAV2（Tyr¹⁴²
）在NINJ2过表达细胞中激活1.7倍（图4D），敲除后ECF敏感性提升2.3倍（图4G）。

临床转化价值
患者类器官模型证实NINJ2高表达与ECF耐药相关（图6B-C）。IHC显示肿瘤组织中NINJ2⁺
区域占比超60%（图6E），高表达患者无进展生存期缩短40%（图6D）。

结论与意义
该研究首次揭示NINJ2通过periostin-VAV2轴维持CD44⁺
CICs特性，驱动胃癌化疗耐药。其临床价值体现在三方面：①NINJ2作为耐药预测标志物优于传统指标；②靶向NINJ2的siRNA疗法可协同ECF抑制复发；③periostin-NINJ2相互作用为小分子抑制剂开发提供结构基础。局限性在于VAV2下游效应器尚未完全阐明，未来需探索其与EMT通路的交叉调控。