血清组分至关重要：人血小板裂解液（hPL）实现树突状细胞HIV-1感染的生理性建模

本刊推荐：本研究开创性地利用人血小板裂解液（hPL）建立无动物成分的树突状细胞（DC）培养体系，成功模拟HIV-1感染过程中CD11c+CD209+DC的生理应答。hPL培养的DC在表型（CD83/CD86/HLA-DR）和功能（HIV-C感染效率）上与传统胎牛血清（FCS）培养体系相当，为HIV病毒-免疫细胞互作研究提供了更贴近生理环境的标准化模型。

　　

引言

树突状细胞（Dendritic Cells, DCs）作为抗原呈递细胞（APCs）的异质性群体，在免疫调节和耐受诱导中发挥核心作用。单核细胞来源的树突状细胞（monocyte-derived Dendritic Cells, moDCs）因其可通过CD14⁺外周血单核细胞大量生成，成为研究炎症与感染过程的常用模型。在HIV感染中，DC通过特征性标志物CD209（DC-SIGN）识别病原体，其功能状态直接影响病毒感染进程。现行moDCs分化方案普遍采用胎牛血清（Fetal Calf Serum, FCS）培养基，但其中未明确成分可能影响细胞分化行为，且存在异源性风险。为遵循3R原则（替代、减少、优化）并提升临床转化价值，本研究系统评估人血小板裂解液（human Platelet Lysate, hPL）作为无动物成分培养基添加剂的可行性。

免疫表型对比：hPL支持高效moDCs分化

通过磁珠分选获得高纯度人外周血CD14⁺单核细胞，分别在含10% FCS、5% hPL及1% FCS预包被+5% hPL（chPL）的RPMI培养基中，联合GM-CSF和IL-4诱导DC分化。第6天流式细胞术分析显示，三种培养条件均能成功生成CD11c⁺CD209⁺ moDCs，细胞形态与散射光特征无显著差异。值得注意的是，hPL组细胞黏附性增强，这与既往研究中黏附性DC高表达成熟标志物（MHCII、CD83、CD86）的现象相呼应。尽管hPL组CD11c表达强度略低于FCS组，但CD209荧光强度相当，证实hPL具备支持DC分化的完整潜力。

HIV感染模型中成熟标志物的动态调控

为验证hPL-DCs在感染性疾病研究的适用性，研究团队采用补体调理HIV-1（HIV-C）和非调理HIV-1（HIV-1）刺激细胞，并对比LPS诱导的成熟DCs（mDCs）与未刺激幼稚DCs（iDCs）的表型变化。流式分析揭示：在所有培养条件下，HIV-C暴露均导致CD11c表达下调——这与HIV患者体内CD11c⁺ DCs耗竭的临床观察一致。同时，HIV-C和LPS刺激均显著上调共刺激分子CD83与CD86表达，但FCS组成熟标志物上调幅度更高。共聚焦显微镜检测证实，所有组别HLA-DR表达均为阳性，且hPL组细胞在感染后存活率更高，提示其可能提供更优的生存微环境。

hPL体系为HIV感染研究提供生理相关性模型

DC在病毒捕获与传递中的核心作用使其成为HIV-1传播研究的关键靶点。通过mCherry标记病毒颗粒的共聚焦显微镜分析发现：HIV-C感染在所有培养体系中均显示更高病毒颗粒密度，且病毒斑点面积显著大于HIV-1组。定量分析表明，FCS组绝对病毒产量更高，但经细胞数标准化后，hPL与chPL组仍呈现HIV-C感染优势。ELISA检测p24抗原证实：HIV-C刺激显著提升病毒capsid蛋白产量，且FCS预包被体系（chPL）能进一步增强病毒生成。

病毒-细胞互作的空间分析揭示重要现象：XYZ三维分析显示，仅HIV-C感染的DCs中病毒颗粒与CD11c存在共定位，而非调理病毒（HIV-1）则缺乏此特征。这表明补体调理作用可能通过特异性膜微结构域促进病毒内化。此外，FCS组细胞间呈现更密集的微管连接网络，提示其可能增强细胞间病毒传播效率。

讨论与展望

本研究首次建立基于hPL的无动物成分moDCs分化体系，证明其在表型特征、成熟能力与HIV感染应答方面与传统FCS体系具有可比性。hPL不仅克服了FCS的批次差异性与异源风险，其诱导的细胞黏附性增强可能更贴近体内炎症环境下DC的生物学行为。值得注意的是，hPL组分中富含的血小板源性因子（如TGF-β、凝血因子等）可能模拟HIV患者体内血小板活化裂解所致的炎症微环境，为研究HIV相关免疫失调提供更真实的病理生理背景。

尽管hPL在标准化与临床转化方面仍面临挑战（如批次间变异、监管标准化需求），但其为人源化感染模型构建提供了创新解决方案。未来研究可进一步探索hPL在耐受性DC生成、T细胞极化调控等方面的应用潜力，并通过多组学分析揭示hPL特异性因子对DC免疫功能的调控网络。

材料与方法关键点

hPL制备采用过期血小板浓缩物（储存7天后经三次冻融循环裂解），经5500×g离心后0.2μm过滤除菌。每批次hPL混合5份血小板浓缩物（相当于30名供体池），以确保批次一致性。病毒生产通过HEK293细胞转染实现，补体调理（HIV-C）采用正常人血清（NHS）孵育后超速离心纯化。moDCs分化采用1×10⁶/mL CD14⁺细胞，以IL-4（200 U/mL）+GM-CSF（250 U/mL）刺激5天。感染实验采用50 ng p24/100 μL病毒量，24小时后收集上清进行p24 ELISA或细胞固定进行流式/成像分析。统计采用GraphPad Prism 8.0.1，多组比较使用单因素ANOVA与Tukey事后检验。