可开关适配体信标探针的系统功能筛选平台开发及其在免洗检测中的应用研究

本研究针对传统免疫分析中操作复杂、易出错的问题，开发了一种系统性功能筛选平台，用于筛选可开关适配体信标探针。通过构建茎环发夹结构信标库，并利用靶标响应荧光激活分选技术，成功筛选出高亲和力、靶标结合后触发荧光的aptamer探针，实现了免洗免疫检测，为细胞内及膜蛋白检测提供了新工具，对高级诊断与研究具有重要价值。

　　

利用亲和结合剂（如抗体和aptamer）的免疫分析在分子生物学中至关重要，但基于这些亲和探针的分析方法发展常受复杂操作步骤的阻碍，这些步骤可能引入误差，尤其在复杂环境（如细胞内和微流体系统）中。开发能够在靶标检测时激活信号的分子探针用于免洗（wash-free）检测日益受到关注。本文报道了一种系统性功能筛选平台，用于筛选可开关适配体信标（switchable aptamer beacon）探针，实现靶标响应检测。在微珠上构建了茎环（stem–loop）发夹状信标库，并通过靶标响应荧光激活分选（fluorescence-activated sorting）进行筛选。所选aptamer信标表现出强亲和力，仅在结合时触发荧光，从而支持免洗免疫检测，用于细胞内和膜蛋白的检测。计算建模（computational modelling）为aptamer结合和结构转换机制提供了见解，揭示了特定蛋白–aptamer相互作用如何驱动茎环解旋和结合后构象变化，这些变化对功能激活至关重要。该方法为生成可开关aptamer工具建立了标准化平台，支持其在高级诊断和研究中的潜力。