体内吲哚和酚类植物激素的动态监测:长期、连续、微创的植物激素传感器

【字体: 时间:2025年04月19日 来源:SCIENCE ADVANCES 11.7

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  在植物研究中,监测植物激素生长素(IAA)和水杨酸(SA)水平意义重大,但现有监测方法存在诸多不足。研究人员开展了植物激素传感器的研究,开发出一种微创安培传感平台,能同时检测 IAA 和 SA,还验证了其监测植物应激反应的能力,为植物诊断和精准农业提供了新工具。

  植物激素在调节植物生长、发育、繁殖以及应对各种生物和非生物胁迫中起着至关重要的作用。然而,这些小分子有机化合物的作用途径常常相互交织,使得阐明它们的具体作用变得困难重重。以生长素(IAA)和水杨酸(SA)为例,它们在调节植物生长和免疫反应等方面发挥着关键作用,且二者之间的相互作用与植物衰老、应对重金属毒性和干旱等过程相关联。
目前,量化和监测这些植物激素水平的方法存在诸多问题。传统的色谱结合质谱法虽常用,但该方法具有破坏性、操作繁琐、成本高昂且只能提供单点测量的缺点,无法满足对植物生长和胁迫过程中连续时空响应监测的需求。基于激素敏感启动子或受体的直接和间接生物传感器,在模式植物中虽有应用,但存在结合亲和力低、干扰细胞发育、易发生转基因沉默等问题,且无法用于普遍的 SA 检测和定位。其他检测 SA 的方法,如报告探针和荧光探针,其检测结果可能无法完全反映内源性植物激素的分布情况。电化学检测方法虽有潜力,但现有传感器存在体内实用性有限、易受电化学污染等问题。

为了解决这些问题,研究人员开展了一项关于开发新型植物激素传感器的研究。研究人员来自未知机构,他们开发了一种基于微针(MNs)的安培传感平台,该平台能够同时检测植物叶片中的生长素(IAA)和水杨酸(SA),并实现长期、连续、微创的监测。这一研究成果发表在《SCIENCE ADVANCES》上,对于植物科学研究和精准农业发展具有重要意义。

研究人员在开展研究时,主要用到了以下几个关键技术方法:首先是材料制备技术,通过共沉淀法合成了 Fe3O4插层的多壁碳纳米管(MWCNTs-Fe3O4),并利用微模塑工艺制备了基于 MNs 的电极;其次是电化学检测技术,采用方波伏安法和计时电流法等对传感器性能进行测试,优化检测条件;最后是体内实验技术,将传感器附着在烟草(Nicotiana benthamiana)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片上,监测植物激素水平的变化。

一、微创安培叶传感器的开发
研究人员构建了由 MWCNTs-Fe3O4工作电极、铂 counter 电极和银 / 氯化银参比电极组成的安培传感平台。通过微针使电极与叶肉直接接触,实现对叶中 IAA 和 SA 的测量。该电极采用微模塑工艺制备,MWCNTs-Fe3O4通过共沉淀法合成。

二、Fe3O4插层 MWCNTs 的表征
利用透射电子显微镜(TEM)、X 射线粉末衍射(XRD)和磁滞测试等手段对 Fe3O4插层 MWCNTs 进行表征。TEM 图像证实了磁铁矿纳米粒子在碳管内的存在,XRD 光谱表明插层反应未影响 Fe3O4粒子的晶体取向和 MWCNTs 的手性,磁滞测试显示材料保留了超顺磁性,且该磁性便于将功能涂层附着到磁性电极上。

三、装置的电化学表征
添加 Fe3O4插层 MWCNTs 可增强铂电极的电化学性能。方波伏安法验证了传感器对 IAA 和 SA 的检测能力,确定了氧化电位。通过计时电流法优化了清洗电压,采用多脉冲安培检测(MPA)提高了传感器的检测性能,确定了检测限(IAA 为 1.41 μM,SA 为 1.15 μM),并进行了选择性测试和寿命测试。

四、体内性能验证
通过碰撞测试证实 MNs 能刺穿叶表皮,且对叶片健康和生长影响较小。将传感器读数与超高效液相色谱 - 串联质谱(UHPLC-MS/MS)测量结果进行对比,验证了传感器在体内的准确性,同时研究了传感器在体内的寿命,发现其可持续检测 25 - 30 小时。

五、光对叶中 IAA 和 SA 的影响
将传感器部署在烟草叶片上,研究光对叶中 IAA 和 SA 水平的影响。结果表明,IAA 水平在光照下倾向于增加,SA 水平在夜间升高,且这些昼夜振荡在老叶中减弱。延长光周期使 IAA 和 SA 的变化更平缓,持续光照导致 IAA 水平下降、SA 水平上升。

六、机械刺激对叶中 IAA 和 SA 的影响
通过周期性刺激烟草叶片研究机械刺激对叶中 IAA 和 SA 的影响。结果显示,机械刺激 20 分钟后,IAA 水平下降,且下降程度与刺激频率有关;SA 水平仅在高频刺激下下降,同时观察到周期性的峰谷变化。

七、病原体对叶中 IAA 和 SA 的影响
用 P. syringae pv. tomato DC3000(Pst. DC3000)和 Botrytis cinerea 感染烟草叶片,研究病原体对叶中 IAA 和 SA 水平的影响。感染后,IAA 和 SA 水平均升高,且不同病原体对 IAA 和 SA 水平的影响存在差异,高浓度病原体感染会导致组织坏死,影响激素水平。

研究结论表明,该研究开发的安培传感器能够以微创方式检测叶中 IAA 和 SA 水平,可扩展到检测其他电化学活性分子。多脉冲安培检测(MPAD)技术延长了电极寿命,保持了传感器的灵敏度,使其可用于检测植物激素的微小变化,作为快速表型分析工具,有助于早期检测植物疾病,减少商业损失。同时,该研究也为植物激素研究提供了新的技术手段,促进了对植物生理响应机制的理解。未来,可进一步探索替代电极材料,提高传感器的灵敏度,以适应大规模农业应用的需求。**<
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