HPV DNA与单分子RNA及p16INK4a蛋白在硬化性苔藓中的直接对比分析：诊断与发病机制的新启示

本研究针对男性生殖器硬化性苔藓（MGLSc）与人类乳头瘤病毒（HPV）的潜在关联展开深入探索。通过结合DNA测序、RNAscope单分子RNA原位杂交及p16INK4a蛋白检测技术，团队首次系统评估了HPV在MGLSc组织中的分布及转录活性。结果显示，尽管HPV DNA普遍存在于所有患者样本中（包括高危型HPV），但转录活性完全缺失，提示HPV可能仅为“过客”而非致病因子。这一发现为MGLSc的临床管理提供了重要依据，并推动了对非HPV驱动发病机制的进一步研究。

　　

男性生殖器硬化性苔藓（Male Genital Lichen Sclerosus, MGLSc）是一种慢性炎症性皮肤病，与阴茎上皮内瘤变（PeIN）和阴茎鳞状细胞癌（PeSCC）的发生密切相关。尽管其病因尚未完全阐明，长期尿液刺激与HPV感染被认为是潜在诱因。然而，既往关于HPV在MGLSc中作用的研究存在矛盾：部分报道提示HPV DNA检出率高，但缺乏转录活性证据；另一些研究则认为HPV仅为“旁观者”。这种争议使得临床决策面临挑战——若HPV确为致病因子，则需针对性干预；反之则需探索其他机制。

为厘清这一关键问题，来自英国伦敦大学学院医院的研究团队在《JID Innovations》发表了一项开创性研究。他们首次对MGLSc患者的包皮组织进行多维度分析：通过DNA测序检测HPV基因型分布，结合单分子RNAscope技术评估病毒转录活性，并辅以p16^INK4a（细胞周期抑制蛋白，高危型HPV感染的标志物）免疫组化验证。这种“三位一体”的研究设计，为HPV在MGLSc中的生物学意义提供了迄今最全面的证据链。

关键技术方法
研究纳入9例未割包皮的MGLSc患者，采集其包皮组织并划分为81个区域（含MGLSc病变区、正常区及交界区）。采用RHA Kit Skin（beta）HPV和SPF10-LiPA25试剂盒进行65种HPV基因型检测；通过RNAscope原位杂交分析HR/LR HPV的E6/E7 mRNA表达；p16^INK4a免疫组化作为HR HPV活性的替代标志。统计学分析采用卡方检验比较组间差异。

研究结果
HPV DNA的分布特征
DNA测序显示所有患者均携带多种HPV类型（2-7型/样本），包括HPV24、23、36等β属类型及HPV18、31等高危型（HR HPV）。值得注意的是，HPV在MGLSc（80%阳性）与非MGLSc区域（94%阳性）的分布无显著差异（P=0.1），HR HPV的检出率亦无统计学差异（16% vs 12%，P=0.6）。这种“马赛克式”分布模式提示HPV感染与病变区域无特异性关联。

转录活性分析
尽管DNA检测阳性，RNAscope在所有样本中均未检出HR或低危型（LR）HPV的E6/E7 mRNA信号。p16^INK4a免疫组化同样全阴性，与RNAscope结果相互印证。这种DNA阳性但转录沉默的状态，明确排除了HPV在MGLSc中的活跃复制或致癌蛋白表达。

讨论与意义
本研究通过多技术联用，首次证实MGLSc中的HPV处于“潜伏感染”状态——病毒DNA虽存在但无转录活性，且与病变区域无空间相关性。这一发现具有三重意义：

1. 临床指导价值：否定了HPV检测在MGLSc诊断中的必要性，避免过度治疗；
2. 发病机制革新：将研究焦点转向非HPV途径（如尿液刺激诱导的慢性炎症）；
3. 方法学示范：确立RNAscope+p16^INK4a的“黄金标准”组合，为其他HPV相关疾病研究提供范式。

值得注意的是，6例患者携带的HR HPV并未导致p16^INK4a过表达或RNAscope阳性，这与HPV驱动型癌症（如宫颈癌）的分子特征截然不同。作者推测MGLSc可能通过破坏上皮屏障促使HPV定植，但病毒本身不参与病变进程。未来研究可深入探索局部微环境（如pH值、微生物组）与MGLSc的关联，或将为靶向治疗开辟新路径。

这项研究不仅解决了长期争议，更重新定义了MGLSc的研究框架——从“HPV中心论”转向“微环境中心论”，为后续探索奠定了坚实基础。