高通量免疫细胞荧光斑点分析技术（HI-CeFSpot）的开发与验证：实现自动化多因子检测的新突破

本文推荐一种新型高通量免疫细胞荧光斑点分析技术（HI-CeFSpot），通过整合Beckman Biomek i7液体处理系统与IRIS 2读板器实现全流程自动化。该技术将FluoroSpot检测的变异系数控制在15%以内，显著提升干扰素γ（IFN-γ）检测的精确度与通量，为疫苗研发和免疫治疗评估提供标准化平台解决方案。

　　

Highlight

HI-CeFSpot技术：基于贝克曼Biomek i7液体处理平台的高通量免疫细胞荧光斑点分析系统，实现从板孔封闭到读板的全流程自动化，为临床终点检测提供标准化解决方案。

Method automation

HI-CeFSpot assay在贝克曼Biomek i7液体处理系统上开发完成（图1A）。该平台配备96孔和384孔双多通道移液头、38个板位存储系统，可全自动完成刺激物添加、细胞接种、试剂分配等操作。通过Biomek 5.1软件编程控制，结合带堆垛机的自动洗板机和Mabtech IRIS 2读板器（搭载Orbitor机械臂），实现三日内完成从板孔封闭到荧光信号读取的全流程自动化。IRIS 2读板器采用固定焦距自校准XY平台和专属分析算法，能精准识别并计数斑点中心。

Discussion

荧光斑点检测（FluoroSpot）是评估细胞水平免疫应答的强大工具。相较于传统ELISpot，其多重荧光检测能力可同步量化多种分泌因子（如IFN-γ）。该技术较流式细胞术具有更高通量、更灵敏的优势（可检测低至10个转染细胞的细胞因子分泌），且检测周期更短。本研究首次实现FluoroSpot全流程端到端自动化，通过BCG疫苗免疫的非人灵长类模型验证，建立了一套适用于多板评估的稳健自动化流程，为临床试验终点检测提供高精度、可重复的多重分析平台。