高效液相与超高效液相色谱法精准测定D&C红No.36中副色素的创新方法研究

本研究旨在解决D&C红No.36（颜料红4）认证中沿用繁琐薄层色谱法（TLC）检测副色素的问题。研究人员开发了HPLC和UHPLC新方法，实现了四种副色素（PO5、Y1N、PR1、PR6）的基线分离与准确定量。方法验证显示优异线性（R2 > 0.999）、低检测限（LOD 0.006–0.018%）及高回收率（85.5 ± 7.4% - 101.8 ± 2.0%）。对24批样品分析表明新方法可替代传统TLC法，为化妆品色素质量控制提供高效技术支撑。

　　

背景：作为D&C红No.36（R36）提交美国FDA认证的颜料红4（PR4）批次，必须符合美国联邦法规（CFR）中的规格要求。目前，采用繁琐的薄层色谱法（TLC）来执行对四种副色素的限量规定：颜料橙5（PO5, CAS 3468–63-1）和黄色-1-萘酚（Y1N, CAS 36265–89-1）各≤ 0.5%，颜料红1（PR1, CAS 6410–10-2）和颜料红6（PR6, CAS 6410–13-5）各≤ 0.3%。

目的：开发改进的分析方法，用于测定提交认证为R36的批次样品中的副色素。

方法：高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UHPLC）是开发新方法所使用的技术。购买了PO5、PR1和PR6的参考物质，并合成了Y1N的标准品，其结构通过高分辨质谱（HRMS）和核磁共振（NMR）确认。通过每种方法制备了用于副色素定量的校准曲线。

结果：两种新开发的方法均实现了四种副色素的基线分离，并可根据确定的保留时间、洗脱顺序和紫外/可见（UV/Vis）光谱进行鉴定。两种方法均显示出良好的线性，每种分析物的R²值均 > 0.999。其他验证数据的范围包括：检测限（LOD）为0.006–0.018%；定量限（LOQ）为0.007–0.05%；回收率为85.5 ± 7.4% 至 101.8 ± 2.0%。新方法用于定量检测24个受调查的R36批次中的分析物，对分析的副色素得出了相同或近乎相同的数值。除两个样品外，所有样品中获得的含量均低于CFR限值。

结论：对于R36中副色素的常规批次认证分析，本研究开发的HPLC或UHPLC方法均可取代过时的TLC程序。

亮点：使用新开发的HPLC和UHPLC方法可以准确定量R36中的副色素PO5、Y1N、PR1和PR6。