一种新型白细胞分离方法，该方法使用高浓度柠檬酸钠溶液来制备tisagenlecleucel

《Transcranial Magnetic Stimulation》：Novel leukocytapheresis method using highly concentrated sodium citrate solution for the manufacturing of tisagenlecleucel

CAR-T细胞疗法中采用高浓度柠檬酸钠（HSC）替代常规抗凝剂（NSC）进行非动员CD3+细胞收集，可显著减少抗凝剂用量（1168 vs 316 mL，p<0.001）和缩短操作时间（254 vs 228 min，p=0.04），同时保持足够的CD3+细胞浓度（≥1×10^9），尤其适用于儿童和小体型患者。研究显示HSC方案未增加电解质失衡或柠檬酸中毒风险，且单次操作即可达标

　　本研究探讨了一种新的方法，即使用高浓度柠檬酸钠（HSC）进行白细胞分离（leukocytapheresis），以提高CD3+细胞的收集效率，从而为生产靶向CD19的CAR-T细胞疗法药物Tisagenlecleucel（tisa-cel）提供支持。研究背景表明，CAR-T细胞疗法在治疗复发或难治性B细胞急性淋巴细胞白血病（r/r B-ALL）或B细胞非霍奇金淋巴瘤（r/r B-NHL）患者中显示出显著的临床效果。然而，大多数这类患者在进行白细胞分离时面临CD3+细胞数量低的问题，这可能与肿瘤细胞浸润或既往治疗有关。此外，传统的白细胞分离方法需要大量抗凝剂（AC）溶液和较长的操作时间，这在儿科患者或体型较小的患者中尤为突出。因此，开发一种更高效、更安全的分离方法成为亟需解决的问题。

在传统的白细胞分离过程中，为了满足tisa-cel的生产要求，通常需要收集一定数量的总核细胞（TNCs）和CD3+细胞，并确保CD3+细胞占TNCs的比例不低于3%。然而，对于CD3+细胞数量较低的患者，传统的分离方法可能需要多次操作或更大体积的血液处理，这不仅增加了患者的负担，还可能导致并发症，如电解质失衡或液体过载。此外，由于使用常规浓度的抗凝剂（NSC），需要更高的AC比例来维持血液的流动性，这可能导致抗凝剂的用量增加，从而增加潜在的风险。为了解决这些问题，研究人员提出了一种新的方法，通过提高抗凝剂的浓度至5.32%来减少所需抗凝剂的总体积，并缩短操作时间。

本研究回顾性分析了2022年11月至2024年6月期间在Okayama大学医院进行的9例使用Spectra Optia连续单核细胞收集模式（cMNC mode）的白细胞分离数据。研究结果显示，在调整处理血液体积（PBV）后，所有患者均能在一天内达到所需的CD3+细胞数量。通过使用HSC，研究团队发现AC溶液的总体积显著减少（1,168 mL vs. 316 mL），并且操作时间也明显缩短（254分钟 vs. 228分钟）。这一结果表明，HSC方法在处理低CD3+细胞计数的患者时具有显著优势，特别是在儿童和体型较小的患者中，这些患者通常需要更长时间的分离过程，以达到所需的CD3+细胞数量。

在讨论部分，研究团队进一步分析了HSC方法在白细胞分离中的应用效果。他们指出，传统方法中，由于需要维持较高的AC比例，导致抗凝剂的使用量增加，从而增加了电解质失衡和液体过载的风险。相比之下，HSC方法通过提高抗凝剂的浓度，能够在不增加AC比例的情况下，实现更高的血液处理速度，从而减少抗凝剂的总体积。这种方法不仅降低了患者的生理负担，还减少了可能的并发症。此外，研究团队还比较了使用HSC和NSC方法的患者在电解质和血小板损失率方面的差异，发现两者在安全性方面相当，没有显著差异。这表明HSC方法在临床应用中具有良好的安全性和可行性。

尽管本研究的结果显示出HSC方法的潜力，但研究团队也指出，由于研究设计为回顾性和单中心，样本量较小，因此需要进一步的前瞻性研究来验证这些发现。此外，由于临床限制，这种方法可能无法广泛应用于其他CAR-T细胞产品的生产，因为其他产品可能对抗凝剂的使用有特定要求。然而，对于tisa-cel的生产，特别是针对儿科患者，HSC方法可能是一个重要的改进方向。

综上所述，本研究提出了一种使用高浓度柠檬酸钠进行白细胞分离的新方法，该方法在减少抗凝剂使用量和缩短操作时间方面表现出显著优势。这一方法不仅提高了CD3+细胞的收集效率，还降低了潜在的并发症风险，特别是在体型较小的患者中。尽管研究结果初步显示了HSC方法的有效性，但仍需更多的临床数据来进一步验证其广泛适用性和安全性。未来的研究应关注这一方法在更大样本量中的表现，并探索其在其他CAR-T细胞产品生产中的应用可能性。