数字TNA-CHA-TR-FRET平台：血清超灵敏miRNA检测新技术助力食管癌早期诊断

《Talanta》：Digital TNA-CHA-TR-FRET Platform for Ultrasensitive miRNA Detection in Serum: A Diagnostic Tool for Early Esophageal Cancer

本文报道了一种新型数字TNA-CHA-TR-FRET检测平台，通过TNA修饰显著降低背景泄漏，结合TR-FRET技术消除血清自发荧光干扰，并采用微流控数字分区策略实现优异线性（R2=0.986）和重复性（CV<5%）。临床验证显示该平台对早期食管癌诊断灵敏度达96%，特异性90%，为无创早期癌症诊断提供了强大工具。

　　

Oligonucleotide Preparation and Handling

所有寡核苷酸链均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，并经过高效液相色谱纯化。冻干的DNA探针用DEPC处理的超纯水溶解，并使用TNaK缓冲液稀释至10 μM工作浓度。为确保形成正确的二级结构，采用PCR仪进行热退火处理：95°C变性10分钟，随后以每分钟降温1°C的速率缓慢冷却至25°C。

CHA Reaction Feasibility and Background Leakage Analysis

针对21nt随机序列设计了相应的发夹DNA探针，并通过热力学计算和实验评估了设计流程及CHA反应的可行性。值得注意的是，本研究所有检测平台的开发和优化过程均使用该随机序列及其对应的CHA探针。基于热力学模拟，采用此设计方法构建的H1和H2探针可形成理想的热力学稳定发夹结构。

Discussion and Conclusion

抑制CHA电路中的背景泄漏对于提高检测灵敏度和可靠性至关重要。目前已开发多种策略应对这一挑战。我们前期研究发现，在CHA反应体系中添加脱氧核苷三磷酸可显著降低背景泄漏。结构创新（如将CHA与聚多巴胺微管波导系统整合或利用空间限域效应）能够物理分离非特异性产物。