无抗体的内联双保留纳米-WCX-μSPE-MS/MS技术用于临床血清中完整甲状旁腺激素及其拮抗片段的定量分析

《Analytical Chemistry》：Antibody-Free Inline Dual-Retention Nano-WCX-μSPE-MS/MS for Quantification of Intact Parathyroid Hormone and Antagonistic Fragments in Clinical Serum

双组分降钙素原检测技术及临床应用价值分析。采用微固相萃取-质谱联用技术，实现血清中降钙素原（PTH 1-84）及其抗片段（PTH 7-84）的同步定量检测。该方法具有6.0 pg/mL超低检测限、<10%相对标准偏差，通过在线纯化-富集-检测流程消除基质效应，显著降低溶剂消耗和人工误差。研究证实该技术可有效提升慢性肾病（CKD）及肾骨病患者诊断准确率。

　　

甲状旁腺激素（PTH）是一种由84个氨基酸组成的多肽，对钙和磷的平衡至关重要。然而，在临床检测中，其定量分析面临诸多挑战，尤其是在慢性肾病（CKD）患者中。这主要是由于PTH在血液中的浓度较低、生物基质复杂以及存在PTH片段干扰等因素。传统的免疫测定方法可能因与PTH 7–84片段发生交叉反应而高估PTH水平，或者无法准确检测到这种拮抗性片段。一旦解决了定量阈值和抗体依赖性工作流程的限制，基于高灵敏度和选择性质谱（MS）的技术就可以作为PTH测定的参考方法（RMP）。本文介绍了一种全新的在线弱阳离子交换微固相萃取-串联质谱（WCX-μSPE-MS/MS）技术，能够同时定量临床血清样本中的PTH 1–84及其拮抗剂PTH 7–84。该技术采用羧基功能化的聚苯乙烯纳米球修饰毛细管μSPE柱，结合双弱阳离子交换（WCX）和非极性保留机制，与电喷雾离子化-质谱（ESI-MS/MS）联用，实现样品的在线纯化、富集和检测。这种纳升级别的毛细管萃取方式能有效减少基质干扰并提高灵敏度，同时大幅简化了样品转移步骤。检测限（LOD）可低至6.0 pg/mL（PTH 1–84）或9.0 pg/mL（PTH 7–84），相对标准偏差小于10%。我们的无抗体策略显著降低了溶剂和样品的使用量，避免了人为误差，并已成功应用于临床血清中PTH 1–84和PTH 7–84的准确定量，显示出作为PTH测定RMP的巨大潜力，有助于提高甲状旁腺功能亢进、慢性肾病和肾脏骨病的诊断准确性。