通过Glyco-MRM技术对抗体Fc糖基化的定量靶向分析

《Journal of Proteome Research》：Quantitative Targeted Analysis of Antibody Fc Glycosylation by Glyco-MRM

N-糖基化调控IgG1与Fc受体结合及疾病监测应用LC-MS/MRM方法分析，确定6种糖肽定量下限，发现流感感染者核心岩糖糖基化降低28%，两类疾病均显示半乳糖基化升高。

　　

Fc结构域的N-糖型对IgG1与Fcγ受体IIIA（FcγRIIIa）、Fcγ受体IIb（FcγRIIb）以及补体成分的结合亲和力具有关键调控作用。定量分析抗原特异性的IgG1糖肽有助于深入理解严重病毒感染和自身抗体介导疾病的发病机制。在此，我们开发了一种结合液相色谱（LC）与质谱（MS）的多反应监测（MRM）方法来分析IgG1的糖基化谱型。通过使用带有同位素标记内标的六种糖肽建立了校准曲线，得到的定量下限（LLOQ）分别为：G2（200 pg/mL，70.92 pM）、G0F（500 pg/mL，189.39 pM）、G0NF（40 pg/mL，14.05 pM）、G2S（2.5 ng/mL，802.87 pM）、G1（500 pg/mL，187.98 pM）和G1N（100 pg/mL，34.93 pM）。对于IgG1的绝对定量，LLOQ确定为1.26 μg/mL（8.43 nM）。将基于校准曲线的检测方法应用于流感感染者和COVID-19感染者（感染后3个月内），发现两者具有不同的糖基化谱型：流感感染者核心岩藻糖化程度显著降低（28%），而两种疾病患者的半乳糖化水平均有所升高。该方法为利用广泛可用的液相色谱-质谱（LC-MS）设备进行实验室糖基化变化检测提供了技术平台。