Withaferin A的定量分析：样品预处理过程的优化研究及其与UHPLC–MS/MS检测方法的结合应用

《CHROMATOGRAPHIA》：Quantification of Withaferin A: An Optimization Study for Sample Pre-treatment Process Coupled with UHPLC–MS/MS Determination

Withaferin A (WFA)提取优化及生物安全性研究：采用甲醇超声提取结合C18固相萃取，UHPLC-MS/MS检测显示体外培养植株含WFA 9.42±6.53%·g?1，而田间植株高达4518.55±82.07%·g?1，存在毒性风险，建议通过可控体外培养实现标准化生产。

　　

摘要

Withaferin A（WFA）是一种具有强抗癌、抗炎和适应原特性的生物活性化合物，主要来源于药用植物Withania somnifera（L.）Dunal，通常被称为Ashwagandha。田间种植的植物中WFA的浓度在不同部位存在显著差异，并且还受到环境因素的影响。迄今为止，WFA的提取方法存在较大差异，这凸显了需要标准化方法以确保准确定量。因此，在本研究中，我们评估了多种提取溶剂、提取时间、pH值和纯化方法，以提高回收率和分析精度。研究结果表明，甲醇是最有效的提取溶剂，在中性pH条件下经过25分钟的超声处理可实现最佳提取效果。此外，使用40毫克吸附剂的C18固相萃取法进行1分钟处理可以减少基质干扰。WFA的线性检测范围为2.5至250 ng/g，相关系数（R2）为0.999。在优化的分析条件下，检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1.2 ng/g和3.09 ng/g。超高性能液相色谱-串联质谱（UHPLC–MS/MS）分析显示，Withania somnifera体外培养物中的WFA含量为9.42 μg/g ± 6.53%。相比之下，田间种植的植物中WFA含量显著更高，达到4518.55 μg/g ± 82.07%，如果直接用于制剂中可能会产生毒性。这需要一种高效的提取方法和估算技术。通过在受控环境中进行体外培养并保持代谢产物的稳定性，可以克服田间种植植物的这些问题，从而实现WFA的标准化和优化生产。该方法在复杂基质中具有高灵敏度和特异性，能够提高代谢产物的产量和分析可靠性，为未来研究和植物衍生产品的标准化奠定基础。