基于智能手机LAMP技术的对虾急性肝胰腺坏死病快速诊断平台的构建与优化

《Journal of Investigative Dermatology》：Construction and optimization of a LAMP-based diagnostic platform for acute hepatopancreatic necrosis disease in Penaeus vannamei

本文开发了一种基于环介导等温扩增（LAMP）技术的便携式诊断平台，结合智能手机荧光检测和深度学习算法，实现了对凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）的高灵敏、高特异性现场快速检测。该平台通过优化核酸染料和工作浓度，显著提升了检测的便捷性和准确性，检测限达1拷贝/微升，为资源有限环境下的对虾养殖病害防控提供了创新解决方案。

　　

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^{对虾和病原样本来源}

感染导致AHPND的副溶血性弧菌（Vp^AHPND）和肝肠孢虫（EHP）的对虾样本由东方市中正水产有限公司提供。感染白斑综合征病毒（WSSV）和传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的对虾样本由文昌粤海蓝韵水产科技有限公司提供。收集对虾肝胰腺用于后续DNA提取。

^{染料筛选及最佳工作浓度选择}

在LAMP实验中测试了不同浓度的染料以评估其可视化效果。结果如图2（A–D）所示。SYTO 82在所有三个浓度梯度下均显示出显著效果，并表现出更强的通用性。SYBR Green I和Diamond核酸染料在500×浓度下阳性和阴性管荧光强度存在差异，其中SYBR Green I差异较小。Diamond核酸染料可能值得进一步探索。

^讨论

当前的病原体检测方法成本高昂且劳动密集，因此开发低成本、快速且准确的诊断方法至关重要。等温扩增技术使用水浴等廉价设备，无需昂贵的热循环仪（Wilner等人，2023）。一种无需电泳的等温扩增可视化工具将使得在资源有限的环境中进行现场诊断成为可能。近年来，使用核酸染料进行可视化的方法...