不同生物液体中分离出的细胞外囊泡浓度评估方法的比较

《Biochemistry (Moscow)》：Comparison of Methods for Concentration Assessment of Extracellular Vesicles Isolated from Different Biological Fluids

外泌体定量方法比较研究揭示不同样本来源和方法间差异，条件培养基样本中蛋白含量、NTA和酯酶活性高度相关，而血液血浆等样本存在非外泌体纳米颗粒干扰，胃液样本显示独特外泌体组成特征。

　　

摘要

在外泌体（EVs）的精确量化方面，生物医学研究仍面临重大挑战。尽管已经开发出多种分析方法，但这些方法的可靠性往往受到非囊泡纳米颗粒和生物污染物的影响，尤其是在生物流体中。此外，对于某些EV来源（如子宫穿刺液和胃液），目前尚未对其进行定量评估。本研究的目的是对比分析三种EV量化方法：总蛋白含量测定、纳米颗粒追踪分析（NTA）以及使用市售FluoroCet外泌体定量试剂盒对从不同生物流体中分离出的EVs进行的酯酶活性检测。这些生物流体包括血浆、腹水、子宫穿刺液、胃液以及由卵巢癌细胞和非小细胞肺癌细胞培养液制备的培养基。对于来自培养基的EV样本，这三种方法显示出强烈的相关性，证明了它们在高度纯化样本中用于体外EV量化的有效性。相比之下，血浆、腹水和子宫穿刺液中的EVs在不同方法之间存在差异，这可能是由于非囊泡纳米颗粒的存在所致。值得注意的是，胃液中的EVs在蛋白含量和酯酶活性方面表现出强烈的相关性，表明该流体中存在大量与囊泡相关的蛋白质，且可能具有独特的EV组成。这些发现强调了进行EV量化时需要采用多因素综合方法的重要性，需考虑样本来源及所使用特定方法的局限性。这些结果可为制定标准化的EV量化方案提供依据，这对于临床样本分析尤为重要。