基于MIRA-LFD技术的水生动物源锥虫可视化快速检测方法开发

《Veterinary Parasitology》：Development of a visual rapid detection method for aquatic animal-derived Trypanosoma via MIRA-LFD

本研究开发了一种结合多酶恒温快速扩增（MIRA）与侧流层析试纸条（LFD）的水生动物源锥虫快速检测方法。该方法以锥虫小亚基核糖体DNA（SSU rDNA）为靶标，在45℃条件下15分钟即可完成扩增，5分钟实现可视化判读，灵敏度达8 pg/μL（较常规PCR提升1000倍），且与常见水生动物寄生虫及宿主无交叉反应。临床验证显示其检测率（100%）显著优于PCR（83.33%），为水产锥虫病现场诊断提供了高效技术支撑。

　　

Highlight

下游引物筛选

下游引物筛选结果如图2所示：三种下游引物均未与探针结合产生假阳性，且能有效扩增锥虫DNA产生特异性条带。其中zc-ssu-R2、zc-ssu-F1与zc-ssu-P组合的条带尤为清晰，故选择下游引物zc-ssu-R2用于后续实验验证。

上游引物筛选

以zc-ssu-R2为固定引物进行上游引物筛选...

讨论

近年来锥虫病已在多种水产养殖动物中广泛传播，如尼罗罗非鱼暴发时死亡率高达50%，大口黑鲈日死亡率达0.2%~0.5%。目前尚无特效药物或疫苗可防控该病，且传统检测方法（如血涂片镜检）灵敏度低，PCR技术耗时长且依赖专业设备。本研究建立的MIRA-LFD技术突破这些局限，为水产锥虫病的早期预警提供了革命性解决方案。

结论

本研究开发的MIRA-LFD方法在水生动物源锥虫检测领域取得重大突破，其高灵敏度、强特异性和操作便捷性使其成为实验室与现场检测的理想工具。该技术有望通过早期精准诊断提升水产养殖疾病防控水平，为产业健康发展保驾护航。