利用新型电化学发光（ECL）免疫测定方法检测人血浆中针对抗体药物偶联物（ADC）PYX-201的抗药物抗体（ADAs）

《Current Analytical Chemistry》：Detection of Anti-drug Antibodies (ADAs) to an Antibody-drug Conjugate (ADC) PYX-201 in Human Plasma Using a Novel Electrochemiluminescence (ECL) Immunoassay

抗体药物偶联物PYX-201靶向纤维连接蛋白B外显子变异体，开发电化学发光免疫检测方法用于抗体筛查和确认，验证结果显示该方法灵敏度达5.34ng/mL，稳定性良好，支持临床研究。

　　

摘要

背景：PYX-201是一种抗体药物偶联物（ADC），由完全人源的IgG1抗体、可切割的连接子mcValCitPABC以及有毒的auristatin载荷Aur0101组成，其药物-抗体比（DAR）约为4。PYX-201是一种有前景的肿瘤治疗候选药物，因为它针对的是纤维连接蛋白的额外结构域B（EDB + FN）的剪接变体，这种变体在正常成人组织中的表达水平较低，而在多种人类实体肿瘤中则表现为中等或高水平。

方法：开发并验证了一种电化学发光（ECL）免疫测定方法，用于检测人血浆中针对PYX-201 ADC的抗体（包括筛查、确认和滴定）。抗PYX-201抗体通过生物素标记的PYX-201（Bio-PYX-201）捕获，并通过鲁塞尔化PYX-201（Ru-PYX-201）在Meso Sector imager S 600或6000读数仪上进行检测。

结果：筛查临界值因子（SCPF）、确认临界值（CCP）和滴定临界值因子（TCPF）分别为1.11、20.7%和1.23。抗PYX-201抗体的灵敏度在筛查试验中为2.25 ng/mL，在确认试验中为5.34 ng/mL；抗PYX-201单克隆抗体（mAb）的灵敏度在确认试验中为7.70 ng/mL。阳性对照品的设置如下：低阳性对照（LPC）为14.0 ng/mL，中等阳性对照（MPC）为100 ng/mL，高阳性对照（HPC）为5,000 ng/mL。在该方法中，药物耐受性在HPC水平下可达200 μg/mL，在MPC水平下可达100 μg/mL，在LPC水平下为0 μg/mL。筛查试验中阳性对照品的批内变异系数（%CV）≤ 4.5%，确认试验中为≤ 11.5%；批间变异系数（%CV）在筛查试验中≤ 13.6%，在确认试验中≤ 19.2%。该ADA方法未发现钩效应、溶血效应或脂血效应。抗PYX-201抗体在室温下或经过六次冻融循环后，在人血浆中保持稳定至少24小时。

结论：首次在任何生物基质中报告了抗PYX-201 ADA的生物分析方法验证结果。该方法已成功应用于人类样本分析，以支持临床研究。