基于量子点的猪δ冠状病毒核衣壳蛋白双抗体夹心免疫层析试纸条的快速检测新方法

《Microbial Pathogenesis》：A quantum dot-based double-antibody sandwich immunochromatographic strip for rapid detection of porcine deltacoronavirus targeting the nucleocapsid protein

本文开发了一种新型量子点免疫层析试纸条（QD-ICS），采用双抗体夹心法检测猪δ冠状病毒（PDCoV）核衣壳蛋白。该技术具有高灵敏度（检测限236.661 TCID50/mL）、强特异性（无交叉反应）和优异稳定性（37℃保存6个月），临床符合率达96.7%，为现场快速诊断提供了理想工具。

　　

亮点

主要试剂、耗材和抗体

所有免疫层析试纸条组件，包括硝酸纤维素膜（NC膜）、结合垫、样品垫、吸水纸、PVC底板和塑料卡均购自上海金标科技。采用XYZ平台点膜仪喷涂控制线（C线）和检测线（T线）。水溶性羧基修饰量子点（Q2625）购自武汉佳源量子点技术公司。

兔抗PDCoV-N多克隆抗体的制备与纯化

经过四次重组PDCoV-N蛋白免疫后，通过心脏穿刺采集新西兰白兔血液并分离抗血清。使用Protein A/G琼脂糖树脂纯化多克隆抗体。变性SDS-PAGE分析显示两条特异性条带（约55 kDa和25 kDa），分别对应IgG重链和轻链（图2），成功证实了抗PDCoV-N多克隆抗体的制备。

讨论

PDCoV作为新发肠道病原体，不仅威胁全球养猪业健康，更展现人兽共患潜力，亟需开发灵敏高效的现场检测技术。虽然实时荧光定量PCR（real-time RT-PCR）灵敏度卓越，但其对专业设备和技术的依赖限制了在资源匮乏地区的应用。相比之下，传统免疫层析试纸条（如胶体金技术）虽便携快速，但灵敏度不足难以满足低病毒载量检测需求。

结论

我们成功开发了基于量子点技术的双抗体夹心免疫层析试纸条（QD-ICS），靶向PDCoV核衣壳蛋白（N蛋白）实现快速检测。该检测方法灵敏度显著优于胶体金法，仅需便携紫外灯即可判读，无需专业设备或操作人员。其简便性和便携性使其成为资源有限地区或现场环境下PDCoV诊断和流行病学监测的理想工具。