| 如凝胶过滤或者离子交换层析有效去除。图4 表示的是用MabSelect纯化一个人多抗和一个单克隆抗体时蛋白A配体的脱落情况，并与rProteinA Sepharose Fast Flow 脱落的比较。
图4. 不同产品蛋白A纯化中脱落比较[1]
5、易于清洗与除菌
作为连续的纯化生产过程，短期的高产是直接而明显的，然而生产者很自然的要考虑长期的效益。介质的寿命，也就是介质能被重复使用的次数，就是一项重要的指标。很明显，延长介质的使用寿命就意味着减少了每一次纯化的成本。而合适的清洗程序(CIP) 常常是延长介质使用寿命的制约因素。因为蛋白A配体常常要比离子交换中的化学基团对于普通清洗程序(CIP) 所用的试剂更不稳定。
清洗试剂自身成本对于整个生产过程效益影响也同样非常重要，但是却常常被忽视了。作为清洗程序(CIP) 中所使用的化学试剂是不能被重复利用的。一些广泛使用但单一成本并不高的试剂(例如尿素、盐酸胍) 的花费却往往会高于蛋白A介质本身，因为蛋白A介质是用整个使用寿命来计算成本的。
图5. 不同试剂进行在位清洗成本比较[2]
MabSelect能够很容易被清洗与除菌。一般用50 mM NaOH+1
M NaCl 或50 mM NaOH+0.5 M Na2SO4 溶液就可以去除沉淀和变性的物质；用非离子的去污剂或者酒精就可以去除通过疏水作用结合的物质；用0.1 M 醋酸和20% 酒精可以除菌。 |
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图6. 300次纯化与在位清洗后纯化结果重复性比较[2]
二、MabSelect 纯化层析工艺参数评价[3]
(本试验引用于IDEC Pharmaceuticals Corporation，San Diego，CA,
USA 在Gab2002 会议上提供)
近年来，细胞培养技术的进步，使抗体产量大幅上升。而产量的显著提高，工艺的经济性等都对下游工艺的设计提出了挑战。这些挑战包括：在提高产品回收率的同时又能有效地减少杂质含量。在设计IDEC-114Mab下游工艺过程中，IDEC公司评估了两种不同的蛋白A层析填料:Prosep-rA和Mabselect。Prosep-rA因其高选择性和高产率，过去一直用于IDEC-114Mab的生产。然而，最新推出的Mabselect却具有更高的动态载量和选择性。为了从上述两种填料中选出一种最佳的用于IDEC-114Mab纯化，IDEC公司对这两种胶在纯化中进行了对比性研究，在统计学上对这两种胶进行回收率和去杂率评价。
1、实验方法
在设计实验方法中，对Prosep-rA 和Mabselect 凝胶均采用了部分变量(二级分部因子) 设计，部分变量设计除了可以揭示因子间的潜在相互作用外，还可以同时对许多变量进行实验。
在研究中采用全部因子设计来评估所有可能的因子组合是难以实现的。相反，仅采用十六分之一分部因子设计。该设计通过去除揭示多个因子间的相互作用的实验而使实验数目降到十六。这种方法可以用来将不重要的因子与重要的因子区别开来。最后，在各因子变化范围的中点而不是两端进行六次中心点运算来估计响应误差和响应模型曲率。
通过调查每个因子对响应的影响来决定哪些因子是重要的。将影响的绝对值与其对应的累积半正态几率作图。累积半正态几率表示期望值低于某一给定值的百分比，它也是标准偏差的基准(即标准偏差) 。初始模型含有所有不为零的效应(即影响)。那些可忽略的效应和则当作误差。各效应的重要性由对其效应的衰退模型变化分析来决定。 |
