胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶。该酶特异性地水解赖氨酸和精氨酸残基的羧基端。用胰蛋白酶水解分布在蛋白质中的赖氨酸和精氨酸残基而产生的肽段可用作质谱分析,获得的肽图谱用来确定蛋白质。胰蛋白酶常常用于胶内酶解,既蛋白质混合物(细胞抽提物)经凝胶电泳分离,切下感兴趣的条带或斑点,然后用胰蛋白酶水解。酶解产物经纯化,浓缩后进行质谱分析。
胰蛋白酶的专一性对蛋白质的确定是非常重要的。天然胰蛋白酶具有自催化作用,产生假胰蛋白酶,假胰蛋白酶会表现出包括类胰凝乳蛋白酶等许多特异性。 |
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在胰蛋白酶存在下的这类自催化的产物,将产生多余的肽片段而干扰质谱分析。一种猪胰蛋白酶赖氨酸经修饰,产生高活性、稳定的分子,强有力阻止其自催化作用。纯化的胰蛋白酶进一步经TPCK处理,从而使胰凝乳蛋白酶失活。处理后的胰蛋白酶又经亲和层析纯化,冷冻干燥。每一批金牌胰蛋白酶,质谱级均经胶内酶解,质谱分析的质量控制试验检验。
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Gold, Mass Spectrometry Grade(#TB309)。 |
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