普洛麦格中文通讯 第六期 2003
 
 
能。CellTiter-GloTM测试系统只有两种组分,因而适用于进行大量平板的检测。并且由于许多细胞繁殖测试系统含有多组分而发生的移液错误几率也会显著降低。另外,荧光素酶反应产生的发光信号半衰期为5个小时,因而在进行大量平板测试时,信号强度不伴随性减少。这种特点适用于自动化平台操作。

对于CellTiter-GloTM Assay和CellTiter 96?AQueous One Solution Assay,哪一种系统最适用于我的实验?

  CellTiter-GloTM发光细胞活力测试系统只需将CellTiter-GloTM试剂加入到细胞培养基中10分钟后即可得到分析数据,而CellTiter 96® AQueous One Solution Assay细胞繁殖测试系统(产品目录号:G5421)需要1-4小时的孵育时间。对于大量平板的检测,数据的快速收集对操作者是相当重要的。另外当检测细胞数目较小时,CellTiter-GloTM测试系统的优势在于其高度的灵敏度。例如,50个Jurkat细胞产生的发光信号比背景高出3个标准差。然而,CellTiter 96® AQueous One Solution Assay细胞繁殖测试系统容许将平板重新放置37℃孵育,进行进一步显色。

CytoTox 96® 和CellTiter 96® 测试系统和放射性标记方法如3H-胸腺嘧啶和51Cr相比,功效如何?

  比较CellTiter 96® 无放射性细胞繁殖测试系统(产品目录号:G4000)和3H-胸腺嘧啶分析方法,CellTiter 96® 测试Formazan吸收值测量值和3H-胸腺嘧啶掺入分析的放射性测量值有显著的相关性。同样,CellTiter 96® 无放射性细胞毒性测试和51Cr释放方法也显示相同的相关性。

细胞增殖测试和凋亡检测需要何种仪器?

  如上所述,CellTiter-GloTM测试系统基于样品中ATP总量检测荧火虫荧光素酶产生的发光信号。因而需要荧光发光计测定荧光素酶活性,随后得到ATP水平。由于裂解时间较长,因此在使用CellTiter-GloTM测试系统时不建议使用配备有注射器的荧光发光计。 Apo-ONETM均质Caspase-3/7测定系统需要一台荧光仪。CellTiter 96® AQueous One Solution Assay细胞繁殖测试及CellTiter 96® 测试需要一台分光光度计,吸收波长范围从490nm到570nm。

参考文献:

1. Sperandio, S., de Belle, I. And Bredesen, D. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 14376-14381.
2. Villa, P., Kaufmann, S.H. and Earnshaw, W.C. (1997) TIBS 22, 388-392.
3. Niles, A. and Humpal-Winter, J. (2001) Ceff Notes 2, 2-3.
4. Apo-ONETM Homogeneous Caspase-3/7 Assay Technical Bulletin, #TB295, Promega Corporation.
5. Hannah, R. et al. (2001). Cell Notes 2, 11-13
6. CellTiter-GloTMLuminescent Cell Viability Assay Technical Bulletin, #TB288, Promega Corporation.


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