普洛麦格中文通讯 2002年第五期

摘要：
　　GoTaq^TM DNA聚合酶是Promega公司Taq DNA 聚合酶的新配置包装，其中提供了两种缓冲液——绿色GoTaq^TM反应缓冲液（Green GoTaq^TM Reaction Buffer）和无色GoTaq^TM反应缓冲液（Cilirless GoTaq^TM Reaction Buffer）。采用绿色GoTaq^TM反应缓冲液和GoTaq^TM DNA聚合酶扩增的PCR产物可直接上样到琼脂糖凝胶中进行电泳，省略了在电泳前需要向PCR产物中加入载样缓冲液这一步骤。如果PCR产物不需进行凝胶电泳或者绿色GoTaq^TM反应缓冲液中的染料对PCR产物的下游应用有影响，则可使用试剂盒中提供的另一PCR反应缓冲液——无色GoTaq^TM反应缓冲液。

使用GoTaq^TM DNA聚合酶结合绿色GoTaq^TM反应缓冲液进行PCR扩增，PCR产物可直接加入凝胶中电泳而无须和凝胶载样缓冲液混合。

前言:
　　 PR和RT-PCR是生物学研究中的常用技术，TaqDNA聚合酶是这些技术最常用的热稳定性DNA聚合酶。Promega公司更新了这一普遍使用的TaqDNA聚合酶的包装配置，新的包装中提供了两种新的反应缓冲液，其产品命名为GoTaqTM DNA聚合酶。
　　一般研究者扩增DNA片段后，经常采用琼脂糖凝胶电泳方法分析扩增的DNA片段。为了提高该过程工作效率，我们研制开发了绿色GoTaq^TM 反应缓冲液，当用于GoTaq^TM DNA聚合酶扩增反应时，PCR产物可直接加入凝胶中电泳而无须和凝胶载样缓冲液混合。
　　GoTaq^TM DNA聚合酶系统包括适量的Taq DNA聚合酶，并提供了两种缓冲液，5X绿色GoTaq^TM反应缓冲液和5X无色GoTaq^TM反应缓冲液。当稀释到单倍浓度时，绿色GoTaq^TM反应缓冲液具有足够的沉降度，可直接上样到琼脂糖凝胶和非变性TEB聚丙烯酰胺凝胶的胶孔中。这种缓冲液含有两种染料，在电泳

时分离产生一条蓝带和一条黄带，可用于监控电泳的过程。
　　当扩增产物不经过纯化而直接进行吸光值和荧光值测定时，建议用5X无色的 GoTaq^TM反应缓冲液和GoTaq^TM DNA聚合酶进行扩增反应。无色GoTaq^TM反应缓冲液和绿色GoTaq^TM反应缓冲液的组成成分相同，只是不含有两种染料。两种5XGoTaq^TM反应缓冲液中MgCl2的浓度都为7.5 mM, pH8.5 (即在1X缓冲液含有1.5 mM MgCl2 )。

　　本文介绍了GoTaq^TM DNA聚合酶及其反应缓冲液的特点，阐明了绿色 GoTaq^TM反应缓冲液中染料的性质，对如何选择适当的缓冲液也进行了论述。另外我们将GoTaq^TM DNA聚合酶的扩增特性和Promega公司其它Taq DNA聚合酶进行了比较，并报告了GoTaq^TM DNA聚合酶和RT-PCR、T－载体克隆和其它应用的匹配特性。　

绿色GoTaq^TM反应缓冲液
　　5X绿色 GoTaq^TM反应缓冲液的使用，去除了PCR产物在电泳前须加入载样缓冲液和染料这一步骤，并且胶孔中上样体积范围很大（图１，Panel A），可以通过查看缓冲液中两种染料来监控迁移速度（图2, Panel B）。在1％琼脂糖凝胶中，蓝色染料的迁移速率和3 - 5KB DNA片段相当，黄色染料的迁移速率比扩增用的引物迁移快（<50bp），以确保目的DNA片段保留在凝胶上，这种染料比Promega公司6Xblue/Orange电泳标准DNA分子(产品目录号：G1881)中的橙色染料迁移快。染料对琼脂糖凝胶中的DNA迁移没有影响；有染料存在时，片段和相应的标准DNA分子迁移相同的距离。当上样体积≦20μl时，和蓝色染料一同迁移的DNA片段不会被染料所覆盖。

反应缓冲液的选择：
　　当PCR产物下游应用需要荧光或吸光值测定时建议不要使用５Ｘ绿色 GoTaq(tm)反应缓冲液。反应缓冲液中的染料在225和300nm有吸收光，从而DNA