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| 图1. 用GoTaqTM DNA聚合酶及绿色GoTaqTM反应缓冲液的扩增反应。A.
绿色GoTaqTM反应缓冲液加入琼脂糖凝胶孔。B. 电泳后的兰色和黄色染料。扩增反应物的加样体积分别为5，10，15和20μl，凝胶浓度为1%，电泳缓冲液为TE. |
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浓度的测定值不准确。并且染料在488nm和600-700nm有激发光，这和一些荧光检测仪器的激发光波长一致。尽管黄色染料的激发波长和很多荧光凝胶扫描仪使用的一样，但由于它在凝胶中有很快的迁移速度，因而影响很小。在488nm进行凝胶扫描时，在引物前方对应于黄色染料的位置有一个淡灰色的染料带。
若PCR产物不经过纯化测定吸光值和荧光值时，建议使用5X无色 GoTaqTM反应缓冲液进行扩增。若PCR产物在测定吸光值和荧光值前经过纯化，则扩增也可使用5X绿色
GoTaqTM反应缓冲液。一般的PCR纯化系统如Wizard(r) SV凝胶和PCR纯化系统（产品目录号：A9281），Wizard(r)
PCR Preps DNA纯化系统（产品目录号：A2180）及Wizard(r) MagneSilTM PCR纯化系统（产品目录号：A1930）能够从扩增DNA产物中除去蓝色和黄色染料。也可以用乙醇沉淀扩增DNA或凝胶电泳后将DNA条带切割下来进行纯化。 |
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| PCR操作
采用5X绿色和5X无色GoTaqTM反应缓冲液进行扩增，经我们检测扩增反应具有基本相同的产率和灵敏度。为了说明这一点，我们用人类基因组DNA
(产品目录号：G3041) 作为模板，扩增1.2kb的α-1胰岛素抗性基因，采用GoTaqTM
DNA聚合酶及5X绿色 GoTaqTM反应缓冲液或5X无色 GoTaqTM反应缓冲液，结果这两种缓冲液产率和灵敏度是一样的（图2）。
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| 图2.
使用GoTaqTM DNA聚合酶结合无色或绿色GoTaqTM反应缓冲液检测人基因组DNA中的α-1胰岛素抗性基因片段。用图中给出量的人基因组DNA扩增1.2kb的α-1胰岛素抗性基因片段（产品目录号：G3041）。M泳道为BenchTop
pGEM(r) DNA Markers (产品目录号：G7521)。 |
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| Promega公司现有三种不同的形式的Taq DNA聚合酶，GoTaqTM
DNA聚合酶，缓冲液A中保存的Taq DNA聚合酶（产品目录号：M1861）和缓冲液B中保存的Tag DNA聚合酶(产品目录号：M1661)。采用五个不同的靶位，我们比较了这几种酶的扩增特性，扩增时采用每个酶自带的反应缓冲液（缓冲系统A和B保存的Taq
DNA聚合酶采用Thermophilic DNA 聚合酶缓冲液）。并且对于某些片段的扩增采用高浓度MgCl2，通过使用25mM
MgCl2贮液（产品目录号：A3511）将MgCl2浓度调到适当浓度。GoTaqTM DNA聚合酶采用绿色或无色缓冲液扩增，和其他Taq
DNA聚合酶具有相同功效（图3）。在某些情况下，用GoTaqTM DNA聚合酶扩增可得到更好的结果。另外，GoTaqTM
DNA聚合酶与GoTaqTM反应缓冲液一起使用可成功扩增大范围的DNA片段（图3）。 用于RT-PCR
GoTaqTM DNA聚合酶和任一种GoTaqTM反应缓冲液能够用于非偶联
RT-PCR中cDNA的PCR扩增反应。采用ImProm－ⅡTM反转录系统（产品目录号： |
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