摘 要
以定量ATP为基础，BacTiter-Glo™ 微生物活细胞检测可以确定活细胞的数量。这一简单的方法可以在5分钟之内给出结果，与传统的O.D.测量相比，其高灵敏度使其在微生物生长不久即可检测。该检测可以灵活地以单管方式或多孔板的方式加以应用，可以使用不带进样器的发光光度计或CCD照相机测定生物发光。
| “加入，混合并测定”的方式使本检测成为抗微生物药物开发及普通微生物学的理想选择。 |
前 言
ATP依赖的微生物检测及定量代表了萤光素酶/萤光素生物发光技术的关键应用。传统方法需要两步：加入裂解试剂释放微生物ATP,
然后利用检测试剂诱导生物发光。我们开发了BacTiter-Glo™微生物活细胞检测，它结合了裂解试剂和萤光素酶/萤光素可以灵敏地一步检测微生物细胞。
本检测系统使用专有的试剂配方包含热稳定萤光素酶，Ultro-Glo重组萤光素酶，同时提取细菌细胞中的ATP支持稳定的“辉光型”发光信号。以前，ATP检测试剂使用从Photinus
pyralis中纯化的萤火虫萤光素酶（1-3）。但是，这种酶在体外只有中等的稳定性并且对PH及去污剂等因子敏感，限制了它在浓的及同质的ATP检测中的应用。以另一种萤火虫，Photuris
pennsylvanica, 为基础，我们开发了一种稳定的萤光素酶，使用具有选择特点的方法提高了其在ATP检测中的表现（4）。另外，我们开发了专有配方达到快速并高效地从多种微生物细胞中提取ATP。在BacTiter-Glo™检测中这两种基本要素的结合，使得这一同质的，单一试剂的设计可以用于培养细胞中ATP的检测。这种试剂物理性质稳定并提供了灵敏，稳定的光信号输出。
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简单地加入，混合并测量
本检测使用简单，只需要一次直接将试剂加入到培养基中的细胞。该方法不需要多余的操作步骤，如去除培养基或清洗细胞，因而减少了因多步操作可能造成的误差。稳定的信号不需要进样器。
本检测操作方法的流程图示于图1。制备BacTiter-Glo™试剂；使用BacTiter-Glo™缓冲液溶解BacTiter-Glo™底物并于室温平衡至少15分钟以减少背景发光（参见操作手册#TB337）。检测时，加入等体积的试剂到微生物培养基中，混合后孵育5分钟。生物发光用发光光度计或充电耦合器（CCD）照相机检测。
图1. BacTiter-Glo™微生物活细胞检测操作方法的流程图。本检测适用于此处所示的多孔板方式及单管检测。 |
