NFAT 单缺陷小鼠 T 细胞：降低 aGvHD 风险与控制巨细胞病毒感染的新希望

在异基因造血干细胞移植（allo-HCT）中，控制移植物抗宿主病（GvHD）和巨细胞病毒（CMV）感染是难题。研究人员开展了 NFAT 单缺陷小鼠 T 细胞相关研究，发现其能降低 aGvHD 风险且有效控制 CMV 感染，为临床治疗提供新方向。

　　在医学领域，异基因造血干细胞移植（allo-HCT）是许多血液恶性肿瘤的治愈性治疗选择。然而，它却伴随着诸多挑战。一方面，患者在接受化疗和 / 或放疗进行预处理后，恶性细胞仍可能残留，导致肿瘤复发。另一方面，供体来源的 T 细胞虽能发挥移植物抗白血病（GvL）效应，清除残留恶性细胞，但同时也会识别并损伤受体组织，引发急性移植物抗宿主病（aGvHD），这成为非复发死亡率和发病率的主要原因。此外，allo-HCT 后感染问题突出，其中巨细胞病毒（CMV）感染尤为棘手，它不仅常导致移植失败，还会加重临床症状，影响患者预后。

为了解决这些难题，德国维尔茨堡大学朱利叶斯 - 马克西米利安斯大学（Julius-Maximilians-University Würzburg）的研究人员 Nadine Hundhausen、Snigdha Majumder、Yin Xiao 等开展了一项关于 NFAT 单缺陷小鼠 T 细胞的研究。他们发现，NFAT 单缺陷的 T 细胞在 allo-HCT 过程中，既能降低 aGvHD 的风险，又能有效控制 CMV 感染，这一成果发表在《iScience》杂志上，为临床治疗提供了新的方向和希望。

研究人员在该研究中运用了多种关键技术方法。在动物模型构建方面，通过特定的小鼠品系杂交获得不同基因型的小鼠用于实验。细胞分离技术上，采用相应试剂盒从不同组织中分离出 BM 细胞、T 细胞等。病毒感染模型建立时，用特定的 MCMV 毒株感染小鼠模拟急性和潜伏感染。还运用了流式细胞术，对不同细胞表面和胞内分子进行检测分析；通过定量 qRT-PCR 测定组织中的病毒基因组载量 。

研究结果如下：

1. 急性 MCMV 感染与 aGvHD：在 allo-HCT 后，急性 MCMV 感染会加重小鼠体重下降和临床评分，但 NFAT 缺陷的共移植 T 细胞仍能部分减轻 aGvHD 症状。研究人员采用单倍体相合 HCT 设置（B6，H-2^b→CB6F1，H-2^{b + d}），在 allo-HCT 后 2 天对小鼠进行急性 MCMV 感染。结果显示，与野生型（WT）T 细胞相比，NFAT 缺陷 T 细胞移植后的 GvHD 评分更低，且能至少与 WT T 细胞一样控制 MCMV，这通过测定急性感染后 6 天和 12 天的病毒拷贝数得以证实。
2. 潜伏 MCMV 感染与 aGvHD：模拟临床高风险场景（D/R+），对 allo-HCT 受体小鼠进行潜伏 MCMV 感染。结果发现，NFAT 缺陷的共移植 T 细胞能控制潜伏 MCMV 感染，且引发的 aGvHD 症状较轻。将 WT、Nfatc₁^-/- 、Nfatc₂^-/-和 Nfatc₁^-/-Nfatc₂^-/-（DKO）T 细胞移植到未感染和 MCMV 阳性小鼠体内，发现移植 NFATc₁和 / 或 NFATc₂缺陷 T 细胞的小鼠体重下降和临床 GvHD 评分低于移植 WT T 细胞的小鼠，且对病毒的控制更好。
3. NFAT 缺陷 Tregs 的变化：通过流式细胞术分析发现，无论是否存在 MCMV 感染，在单倍体相合 GvHD 模型中，NFAT 缺陷的 Tregs 在总 CD4 T 细胞中的频率及其绝对细胞数均增加。
4. 细胞因子和细胞毒性分子表达：NFAT 缺陷的 CD4 和 CD8⁺ T 细胞在 aGvHD 期间产生的促炎细胞因子如 IFN-γ 较少，且在潜伏感染小鼠中，NFAT 缺陷的 CD8⁺ T 细胞表达的颗粒酶 B（GzmB）和穿孔素（Prf1）也减少。
5. T 细胞分化：NFAT 缺陷减少了 CD8⁺ T 细胞的耗竭，促进了 MCMV 特异性 CD8⁺ T 细胞的终末分化。通过对相关标记物的染色分析发现，NFAT 缺陷的 T 细胞中，与耗竭相关的标记物减少，MCMV 特异性的某些细胞亚群数量增加。
6. NFAT 缺陷对 CD8⁺ T 细胞的影响：仅在 CD8⁺ T 细胞中敲除 NFAT 也能降低严重 GvHD 的风险并控制 MCMV 感染。将 WT CD4 T 细胞与不同基因型的 CD8 T 细胞按 1:1 比例共移植到潜伏 MCMV 感染小鼠体内，发现敲除 NFAT 的 CD8⁺ T 细胞能减少体重下降和临床评分，更有效地控制病毒。
7. NFAT 缺陷 MI 细胞的特性：NFAT 缺陷的 MCMV 特异性 M38⁺ CD8 T 细胞亚群不仅数量增加，而且 IFN-γ⁺和 GzmB⁺细胞的频率也增加。通过对不同细胞亚群的分析发现，NFAT 缺陷的 MI 细胞在表达这些效应分子方面具有优势。

研究结论和讨论部分指出，在 allo-HCT 的小鼠模型中，NFAT 单缺陷的 T 细胞相较于 WT T 细胞能改善 GvHD，同时保留 GvL 效应。虽然 MCMV 感染会加重临床结果，但 NFAT 缺陷 T 细胞的移植仍能改善 GvHD 评分。NFAT 缺陷的 T 细胞产生较少的促炎和细胞毒性分子，这有助于减轻 GvHD 症状。同时，MCMV 特异性的 NFAT 缺陷 CD8⁺ MI 细胞数量增加且功能增强，使其能够更好地控制病毒。此外，降低 NFAT 表达水平可能还有助于减少 T 细胞耗竭，增强 MI 表型，从而在 GvHD 期间实现对 MCMV 的持久控制。这一研究为临床 allo-HCT 中控制 GvHD 和 CMV 感染提供了新的策略和理论依据，有望推动相关治疗方法的进一步发展 。