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为测市售片剂中苏沃雷生（SUV）含量，研究人员开发 RP-HPTLC 法，该法准确灵敏且绿色环保。
在当今的医学研究领域，失眠已经成为困扰许多人的常见问题。苏沃雷生（Suvorexant，SUV）作为一种新型的治疗失眠的药物，近年来备受关注。它是一种强效的双食欲素受体（OX1R 和 OX2R）拮抗剂，能够抑制促进清醒的 OX 神经元，从而加速睡眠的 onset 。但由于其具有镇静催眠和抑制作用，存在被滥用的风险，美国药品执法管理局已将其列为联邦管制物质法案附表 IV 中的药物。在法医毒理学方面，准确检测和分析苏沃雷生在生物样本和药物制剂中的含量至关重要。同时，从药物质量控制角度出发，对市售片剂中苏沃雷生进行精准定量也不可或缺。
然而，目前已有的分析苏沃雷生的方法存在诸多问题。大多数分析技术主要用于生物材料中苏沃雷生的测定，仅有少数方法可用于药物剂型中苏沃雷生的检测。并且，关于更环保的高效薄层色谱（HPTLC）方法来测定苏沃雷生的研究在文献中极为匮乏。此外，许多传统分析方法使用有毒有害溶剂，不符合绿色分析化学（GAC）的要求。
为了解决这些问题，来自沙特阿拉伯的 Prince Sattam Bin Abdulaziz University、King Saud University、Northern Border University 以及印度的 Sri Adichunchanagiri College of Pharmacy 等机构的研究人员 Prawez Alam、Faiyaz Shakeel 等人开展了一项研究。他们致力于开发并验证一种反相高效薄层色谱（RP-HPTLC）方法，用于快速、灵敏、环保且能指示稳定性地测定市售药物片剂中的苏沃雷生含量，相关研究成果发表在《BMC Chemistry》杂志上。
研究人员在研究过程中主要运用了以下关键技术方法：首先，使用 HPTLC 系统进行色谱分析，通过自动 TLC 进样器 4（ATS4）将样品以 6mm 条带的形式点样，采用粒径为 5μm 的硅胶预涂覆的 60 RP-18F254S 玻璃板作为固定相。其次，选用乙醇 / 水（75:25 v/v）的混合物作为展开系统，利用 UV 检测器在 255nm 波长下进行检测。最后，采用国际协调会议（ICH）Q2-R2 协议对所建立的方法进行全面验证，并使用分析生态规模（AES）、ChlorTox 和分析绿色度（AGREE）工具评估方法的绿色度。
绿色 HPTLC 方法的开发：研究人员对多种乙醇 / 水比例的混合物作为展开系统进行研究，发现乙醇 / 水（75:25 v/v）的混合物能使苏沃雷生的色谱峰分离效果最佳，在Rf=0.47±0.01处出现清晰且无前沿现象的色谱峰，同时确定了在 255nm 波长下检测能获得最大的 TLC 响应，因此选择该波长用于后续分析。
方法的验证研究：
- 线性关系：研究表明，苏沃雷生在 10 - 1200 ng/band 范围内校准曲线呈良好的线性关系，相关系数（R）为 0.9984，决定系数（R2）为 0.9969，证明了该方法在该浓度范围内检测的可靠性。
- 系统适用性：通过计算保留因子（Rf）、峰不对称因子（As）和每米理论塔板数（N/m）等系统适用性参数，结果显示这些参数均符合要求，表明该方法适用于苏沃雷生的分析。
- 准确性：采用加样回收试验评估方法的准确性，结果显示在三个不同质量控制水平下，苏沃雷生的回收率在 98.18 - 99.30% 之间，证明该方法准确性高。
- 精密度：测定方法的批内和批间精密度，批内变异系数（CV）在 0.78 - 0.87% 之间，批间 CV 在 0.85 - 0.94% 之间，表明该方法精密度良好。
- 稳健性：通过故意改变展开系统的组成来评估方法的稳健性，结果显示苏沃雷生的 CV 在 1.09 - 1.16% 之间，Rf值在 0.46 - 0.48 之间变化，证明该方法具有较好的稳健性。
- 灵敏度：计算方法的检测限（LOD）和定量限（LOQ），苏沃雷生的 LOD 为 3.32 ± 0.08 ng/band，LOQ 为 9.98 ± 0.24 ng/band，表明该方法灵敏度较高。
- 特异性 / 峰纯度：通过对比市售片剂和参考苏沃雷生的Rf数据和 UV 吸收光谱，发现两者具有高度一致性，证明该方法具有良好的特异性和峰纯度。
强制降解评估：研究人员对苏沃雷生在氧化、热、酸、碱等不同条件下进行强制降解试验。结果表明，苏沃雷生在酸、碱和热降解条件下表现出较好的稳定性，未检测到降解产物，仅Rf值略有变化。但在氧化降解条件下，苏沃雷生降解率达到 45.22%，同时产生了两个降解产物，且能通过Rf值进行有效分离，这表明该方法能够在存在降解产物的情况下准确识别苏沃雷生，具备稳定性指示能力。
该方法在市售片剂苏沃雷生测定中的应用：研究人员运用所建立的方法对市售的 A、B 两个品牌的苏沃雷生片剂进行检测。结果显示，两个品牌片剂中苏沃雷生的含量分别为 98.18 ± 1.36% 和 101.32 ± 1.41%，与已报道的 HPLC 方法相比，两种方法在准确性和精密度上无明显差异，证明了该 HPTLC 方法的可靠性和实用性。
绿色度评价：使用 AES、ChlorTox 和 AGREE 三种工具对该方法的绿色度进行评价。结果显示，该方法的 AES 评分为 93 分，表明其绿色度优秀；ChlorTox 总评分为 0.78g，低于 1.00g，说明该方法对环境安全无害；AGREE 评分为 0.88，大于 0.75，同样表明该方法绿色度极佳。与已报道的 HPLC 和 HPTLC 方法相比，该研究建立的 HPTLC 方法在绿色度方面表现更优。
综上所述，该研究成功开发并验证了一种绿色稳定指示、灵敏的反相 HPTLC 技术，用于测定市售片剂中的苏沃雷生含量。该方法具有线性关系良好、稳健性强、灵敏度高、准确性好、精密度高以及绿色环保等优点，能够有效测定市售片剂中苏沃雷生的含量，并且在存在降解产物的情况下仍能准确识别苏沃雷生，具备稳定性指示能力。此外，该方法在绿色度方面优于以往报道的相关方法，为苏沃雷生的分析提供了一种更可靠、更环保的选择，有望在药物质量控制和法医毒理学等领域得到广泛应用。同时，研究人员表示未来可能会利用该 HPTLC 技术进一步研究苏沃雷生在血浆样本中的药代动力学。
